人青少年2型血色素沉着症/幼年型血色病相关蛋白2(HFE2)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，酶标板微孔预先包被抗人HFE2特异性抗体。检测时，样本中的幼年型血色病相关蛋白2与固相抗体特异性结合，洗涤去除未结合杂质后，加入酶标记配对抗体孵育结合，形成固相免疫复合物，经显色、终止反应后测定吸光度，通过标准曲线精准定量样本中HFE2蛋白的含量。
产品参数：

‌灵敏度：检测极限 0.14ng/mL

检测范围：0.45ng/mL～28.8ng/mL

反应时间：37℃温育 78min，酶标二抗 62min，显色 24min

保存条件：试剂盒外包装避光，2～8℃存放，严禁冻融任何液体试剂

显色系统：预制单组份 TMB 显色工作液

检测波长：450nm 单波长检测

标准曲线绘制：浓度对数转换后线性回归绘制标准曲线

注意事项：血清铁过载样本建议 10 倍预稀释后复测，防止超出试剂盒检测上限
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂盒全部试剂室温平衡 32min，配制洗涤工作液；拆分酶标板条并标记实验组别。

标准孔加入倍比稀释 HFE2 标准品 50μL，待测孔加入稀释后体液样本 50μL，空白孔不加样。

非空白孔加入一步法酶联抗体工作液 100μL，密封封板。

37℃恒温避光孵育 68min，延长孵育提升结合效率。

弃净孔内液体，洗涤液洗板 4 次，每次浸泡 40s，拍干残留废液。

每孔加入显色混合底物 100μL，37℃避光显色 17min。

滴加终止液 50μL，酶标仪 450nm 读数，换算样本 HFE2 蛋白浓度。