人神经保护因子(CVNPF)ELISA试剂盒

本试剂盒依托双抗体夹心酶联免疫吸附技术原理，酶标板微孔预先包被抗人神经保护因子特异性抗体。检测时，样本中的CVNPF抗原与固相抗体特异性结合，孵育洗涤后加入酶标记配对抗体，形成稳定的夹心免疫复合物，经底物显色、终止反应后检测吸光度，通过标准曲线定量检测样本中神经保护因子的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：检出限 1.9pg/mL

检测范围：5.6pg/mL～358.4pg/mL

反应时间：37℃孵育 76min，酶标二抗 63min，显色 23.2min

保存条件：神经肽类试剂全程 2～8℃避光，避免光照导致肽链断裂失活

显色系统：A、B 液 1:1 混合配制显色液

检测波长：450nm 单波长测定

标准曲线绘制：夹心 ELISA 四参数非线性拟合标准曲线

注意事项：脑脊液样本冰上转运，离体后室温放置不可超过 20 分钟
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒液体试剂室温平衡 30min，配制洗涤工作液；固定酶标板框架区分孔组。

标准品孔加入倍比稀释 CVNPF 标准品 50μL，样本孔加入预处理待测样本 50μL，空白孔不加试剂。

各检测孔加入一步法酶结合抗体工作液 100μL，封板封口混匀体系。

37℃避光孵育 60min，神经多肽类常规一步法孵育时长。

弃液洗板 4 次，每次洗涤液浸泡 36s，吸水纸吸干孔底残液。

每孔加入显色 A、B 液各 50μL，37℃避光显色 13min。

加入终止液 50μL，酶标仪 450nm 读数，定量神经保护因子含量。