人嗜环蛋白/亲环素A(CyPA)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测原理，微孔板预先包被人亲环素A(CyPA)特异性抗体，待测样本、标准品中的CyPA抗原可与固相抗体特异性免疫结合，洗涤纯化体系后加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体，形成夹心免疫复合物，经底物显色、终止反应后，酶标仪测定吸光度，吸光度数值与样本中CyPA浓度成正比，依据标准曲线实现定量检测。
基本参数‌：

产品名称：人嗜环蛋白/亲环素A(CyPA)ELISA试剂盒

英文名称：CyPA ELISA Kit
货号：Y-E2981

规格：48T/96T

灵敏度：最低可检出 2.1pg/mL

检测范围：12pg/mL ~ 650pg/mL

反应时间：37℃孵育 69min，二抗孵育 46min，避光显色 16min，总用时 2h11min

保存条件：未开启 2~8℃，浓缩试剂分装后 - 20℃可长期保存，开封板条 1 周内用完

显色系统：预装 TMB 显色液，2mol/L H₂SO₄终止反应

检测波长：450nm 单波长读数

标准曲线绘制：半对数坐标拟合，8 个标准品浓度梯度

注意事项：细胞坏死会导致 CyPA 大量释放，坏死上清样本需稀释检测；洗板不可省略步骤
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂盒试剂室温静置 25min，稀释浓缩洗涤液，梯度稀释 CyPA 标准品，区分空白、标品、样本孔。

标准孔加入 50μL 梯度标准液；样本孔加 50μL 稀释液 + 10μL 待测样本；空白孔无加样。

检测孔加入酶标记抗 CyPA 抗体 100μL，封板 37℃孵育 57min。

弃液洗板，每孔注满洗涤液静置 30s，甩干循环 5 次，微孔板拍干。

显色 A、B 液各 50μL 加入每孔，混匀避光显色 14min。

加入终止液 50μL 终止并混匀。

450nm 测定 OD 值，计算 CyPA 含量。
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