人天门冬氨酸氨基转移酶(AST)ELISA试剂盒

本试剂盒采用特异性免疫夹心ELISA原理，固相包被的人AST抗体可捕获样本中的天门冬氨酸氨基转移酶，孵育完成抗原抗体结合后，洗除体系中游离杂质，加入酶标记特异性二抗形成免疫复合物，经洗涤后加入显色底物进行酶促反应，显色强度与样本中AST含量成正比，通过检测吸光度、拟合标准曲线，即可定量测定样本中天门冬氨酸氨基转移酶的活性及含量。
基本参数‌：

产品名称：人天门冬氨酸氨基转移酶(AST)ELISA试剂盒

英文名称：AST Elisa Kit
货号：Y-E996

规格：48T/96T

灵敏度：≤0.1U/L

检测范围：2～220U/L

反应时间：样本孵育 55min，二抗 38min，显色 13min

保存条件：试剂盒 2～8℃，浓缩洗涤液室温可放置 90 天

显色系统：改良 TMB 显色体系

检测波长：450nm+630nm 双波长

标准曲线绘制：线性回归法绘制标准曲线，直接代入计算样本活性

注意事项：溶血样本红细胞内 AST 释放，会造成检测结果假性升高
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂盒室温回温 30min，AST 包被酶标板去除孔内封存液，洗板 2 次，拍干微孔水分。

排布孔位：空白、标准品、血清样本孔；标准品孔加入梯度 AST 标准品 50μL，样本孔加入稀释血清 50μL，空白孔添加稀释缓冲液。

每孔加入 HRP 标记抗体液 50μL，密封封板，37℃孵育 55min。

倒掉孔内液体，洗板液浸泡 30s 弃液，重复洗板 6 次，倒置拍干。

每孔加入显色底物液 100μL，避光 37℃显色 16min。

加入终止液 50μL，轻摇板体终止显色。

450nm 测吸光度，根据标准曲线测定 AST 含量。
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