本试剂盒采用经典双抗体夹心ELISA技术原理，酶标板预先包被抗人CTLA-4/CD152特异性抗体，样本中的靶抗原与固相抗体特异性结合，洗板去除未结合组分，加入辣根过氧化物酶标记二抗形成免疫复合物，洗除游离抗体后启动底物显色反应，显色强度与靶抗原含量成正比，通过标准曲线比对实现定量检测。
基本参数：
产品名称：人细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4/CD152)ELISA试剂盒
英文名称：CTLA-4 ELISA Kit
货号：Y-E2833
规格：48T/96T
灵敏度：最低检出 0.05ng/mL
检测范围：0.09～8.7ng/mL
反应时间：封闭 35min，样本孵育 94min，二抗 57min，显色 16min
保存条件：试剂盒 2～8℃冷藏，试剂瓶禁止倒置漏液
显色系统：HRP 催化双组份 TMB 显色
检测波长：450nm 单波长读数
标准曲线绘制：六组标品梯度，软件自动生成标准曲线方程
注意事项：免疫细胞上清样本需去除细胞沉淀，避免非特异性吸附
关键注意事项：
本试剂盒仅科研体外检测，严禁临床诊断使用。
全程避免试剂、板条强光直射，TMB 见光易失效。
移液器吸头一次性使用，杜绝交叉污染；所有操作无酶、无热源。
孵育温度严格控制 37℃，温度偏低会降低 OD 值、灵敏度下降。
洗板必须充分，残液会造成非特异性结合，背景偏高。
终止后需快速读数，放置过久吸光度会漂移，结果失真。
终止液含稀硫酸，避免接触皮肤、眼睛，若不慎接触大量清水冲洗。
实验废弃物按生物安全废弃物规范处理。
不同批次试剂盒组分不可混用。
试剂盒运输全程 2～8℃冷链，严禁高温暴晒。
实验步骤如下：
试剂盒室温回温 30min，CTLA-4 捕获抗体包被板弃孔内保护液，洗涤液洗板 1 次，吸水纸拍干备用。
规划孔位：空白孔、系列标准品孔、淋巴细胞裂解样本孔；标准品孔加入梯度 CTLA-4 标准品 60μL，样本孔加入稀释裂解液 60μL，空白孔添加稀释缓冲液。
每孔加入 HRP 标记检测抗体 60μL，封板膜封闭，37℃湿盒孵育 71min。
掀开封板倒掉废液，洗涤液浸泡每孔 40s 弃液，洗板 6 次，倒置拍干微孔水分。
配制显色工作液每孔加 100μL，37℃避光显色 14min。
每孔加注终止液 50μL，轻摇酶标板终止底物显色。
450nm 读取吸光度，拟合标准曲线计算 CTLA-4 蛋白含量。
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