人细胞外基质磷酸糖蛋白(MEPE)ELISA试剂盒

本试剂盒基于固相双抗体夹心酶免疫分析原理，以包被于微孔板的抗人MEPE特异性抗体为固相捕获抗体，结合样本及标准品中的MEPE抗原，孵育完成特异性抗原抗体结合反应，洗涤去除未结合的杂蛋白、游离成分后，加入HRP标记的MEPE检测抗体，形成稳定夹心免疫复合物，底物显色体系在酶的催化下产生蓝色产物，终止后转为黄色，吸光度数值与样本中MEPE含量呈正相关，通过标准曲线即可定量检测样本中MEPE浓度。
基本参数‌：

产品名称：人细胞外基质磷酸糖蛋白(MEPE)ELISA试剂盒

英文名称：MEPE ELISA Kit
货号：Y-E3511

规格：48T/96T

灵敏度：最低检出 0.05ng/mL

检测范围：0.1-6.4ng/mL

反应时间：37℃样本孵育 75min，酶标抗体 55min，显色 10min

保存条件：全套试剂 2～8℃避光保存，浓缩洗涤液常温短期放置不失效

显色系统：改良型 TMB 显色底物，终止后颜色稳定 30min

检测波长：450nm 单波长检测

标准曲线绘制：线性拟合曲线，R² 需大于 0.99 方可判定试剂盒有效

注意事项：骨组织来源样本含钙离子会干扰结合反应，样本需离心去除钙化沉淀后再稀释上样
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂盒室温平衡 28min，稀释一步法酶标记抗体工作液，标记空白、标准、样品孔。

各孔预先添加酶标记液 50μL，标准品孔加入梯度 MEPE 标准品 50μL，样本孔加稀释后待测液 50μL，空白孔补稀释液。

封板 37℃孵育 60min，弃净孔内液体，洗板 5 次，每次浸泡 30s，吸水纸彻底拍干。

每孔分别添加显色液 A、B 各 50μL，轻微震荡混匀。

避光 37℃显色 14min，达到梯度色差后准备终止。

加入终止液 50μL，混匀终止显色。

450nm 读取吸光值，通过标准曲线计算 MEPE 含量。
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