背景[1-3]
人甲状腺抗体(TAB)ELISA KIT是用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗APF抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗APF抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的APF呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
人甲状腺抗体(TAB)
操作步骤
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。
3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。
5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。
7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。
应用[4][5]
用于定量检测人甲状腺过氧化物酶抗体的荧光酶免疫法的建立及临床应用研究
利用分子生物学方法在原核系统表达hTPO抗原决定簇片段,以基因工程产品为抗原,建立定量检测hTPOAb的FEIA,并用于临床作为AITD的诊断、鉴别诊断和疗效监测手段。
方法：在表达菌株E.Coli BL21中诱导表达含有本室构建的hTPO抗原决定簇“热点”区基因（1702-2622,编号相对于起始密码,编码AA568-874）的重组表达质粒pGESJ,经纯化获得GST-hTPO（谷胱甘肽巯基转移酶-人甲状腺过氧化物酶）融合蛋白,并对其进行分子量和免疫活性鉴定。
以重组融合蛋白GST-hTPO为抗原包被96孔透明板,样品血清中hTPOAb为一抗,碱磷酶标记的羊抗人IgG为二抗,4-MUP（4-甲基磷酸伞形酮）为荧光底物建立了板式FEIA,利用经国内标准品校正的本室标准物建立标准曲线以实现本法的定量检测,并对本法的特异性、精密度、准确度、健全性等进行了方法学鉴定。
用该法测定262例正常人,五类甲状腺疾病患者534例,包括Graves’病（GD）270例,桥本氏病（HT）166例,单纯甲肿43例,亚甲炎38例,腺瘤17例。
结果：GST-TPO融合蛋白的表达、纯化及鉴定以E.Coli BL21为表达菌株,以IPTG（isopropylβ-D-thoiglactoside,异丙基β-D-硫代半乳糖苷）为诱导剂,浓度0.1mM,25℃诱导5.5小时,产物经Glutathione Sepharose 4B（谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B）亲和层析纯化后,使用SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳）测定GST-hTPO分子量结果为61.24KD,经考马斯亮蓝染色法定量获得融合蛋白表达产率为12mg/L培养基,FEIA结果证明GST-hTPO具有良好免疫活性。
参考文献
[1]Value of Combined Clinical Information and Thyroid Peroxidase Antibodies in Pregnancy for the Prediction of Postpartum Thyroid Dysfunction[J].SheilaMamede da Costa,LinoSieiro Netto,Claudia MedinaCoeli,AlexandruBuescu,MarioVaisman.American Journal of Reproductive Immunology.2007(4)
[2]Is simultaneous measurement of anti-thyroid peroxidase and anti-thyroglobulin antibodies clinically useful in patients with thyroid dysfunction?[J].Luca Giovanella.Clinical Chemical Laboratory Medicine.2007(2)
[3]EEG Changes in a Patient With Steroid-Responsive Encephalopathy Associated With Antibodies to Thyroperoxidase（SREAT,Hashimoto?s Encephalopathy）[J].Alcibiades J.Rodriguez,Gregory A.Jicha,Thomas D.L.Steeves,Eduardo E.Benarroch,Barbara F.Westmoreland.Journal of Clinical Neurophysiology.2006(4)
[4]Performance characteristics of 5 automated thyroglobulin autoantibody and thyroid peroxidase autoantibody assays[J].Sonia L.La’ulu,Patricia R.Slev,William L.Roberts.Clinica Chimica Acta.2006(1)
[5]张艳丽.定量检测人甲状腺过氧化物酶抗体的荧光酶免疫法的建立及临床应用[D].天津医科大学,2008.