背景[1-3]
NRAS抗体是一种针对神经纤维瘤病型1(NF1)中NRAS基因突变产生的蛋白质的抗体。NRAS基因在细胞信号传导中扮演着重要角色，特别是在控制细胞生长和分裂的过程中。NRAS基因突变可能导致癌症的发生和发展，特别是在黑色素瘤、结直肠癌等肿瘤中。
NRAS抗体是一种针对NRAS蛋白的特异性抗体，广泛应用于生命科学研究和临床诊断中。NRAS蛋白是一种与细胞增殖、分化和凋亡密切相关的原癌基因产物，其异常表达或突变与多种肿瘤的发生和发展密切相关。以下是对NRAS抗体的详细介绍：
NRAS抗体
一、基本信息
抗体名称：NRAS抗体
英文名称：Anti-NRAS Antibody
产品规格：常见规格有50μl、100μl、150μl等，具体可根据供应商和实验需求定制
发货周期：一般为1～3天，但也可能因供应商和订单量而有所不同
保存条件：通常需要储存在-20°C或更低温度下，避免反复冻融
二、抗体类型与来源
抗体类型：包括单克隆抗体和多克隆抗体
抗体来源：常见的有鼠源（Mouse）和兔源（Rabbit）等，具体取决于制备工艺和供应商
三、应用范围
NRAS抗体在科研和临床中有多种应用，包括但不限于：
Western Blot（WB）：用于检测细胞或组织样本中NRAS蛋白的表达水平
Immunohistochemistry（IHC）：在组织切片中定位NRAS蛋白，分析其在肿瘤组织中的表达情况
ELISA（酶联免疫吸附实验）：用于定量检测生物样本中NRAS蛋白或相关分子的含量
其他应用：如免疫荧光（IF）、免疫细胞化学（ICC）等，具体取决于实验目的和样本类型
四、特点与优势
特异性高：NRAS抗体能够特异性地识别并结合NRAS蛋白，减少非特异性结合和背景干扰
灵敏度高：能够检测到低浓度的NRAS蛋白或相关分子
稳定性好：在适当的保存条件下，NRAS抗体能够保持较长时间的活性和稳定性
五、注意事项
在使用NRAS抗体进行实验时，需要遵循供应商提供的说明书和实验指南
注意抗体的稀释比例和实验条件的优化，以确保实验结果的准确性和可靠性
抗体在储存和使用过程中应避免反复冻融和高温暴露
应用实例[4][5]
NRAS抗体可以用于NRASQ61突变对多发性骨髓瘤作用及机制的研究
PI3K-Akt和RAF-MEK-ERK是NRAS激活的两条主要通路。PI3K-Akt通路不仅促进葡萄糖摄取的增加,而且促进糖酵解途径进展。RAF-MEK-ERK途径的激活通过诱导与糖酵解、TCA循环和大分子生物合成有关的转录调节因子的激活促进有氧糖酵解表型。糖酵解能通过抑制细胞凋亡、诱导上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）、诱导自噬、抑制药物流入和增强药物流出诱导耐药。本研究通过构建表达NRASQ61突变的骨髓瘤细胞模型,对NRASQ61突变对骨髓瘤细胞下游信号、增殖、耐药及代谢的影响及机制进行探索,并以糖酵解为基础,为治疗MM提供新的思路和策略。
目的:1.构建NRAS过表达、表达野生型NRAS、表达NRASQ61H、NRASQ61R、NRASQ61K的MM细胞模型,在此基础上探索NRAS过表达及Q61突变对下游信号、细胞增殖、凋亡、耐药的影响;2.明确NRAS过表达及Q61突变对MM细胞代谢的影响;3.探索NRASQ61突变对代谢影响的具体机制以期发现潜在的药物靶点。
方法:1.应用NRAS抗体Western Blot法检测MM细胞株中NRAS及其下游信号p-ERK/2的表达水平;2.采用定点突变PCR、载体双酶切及慢病毒转染技术构建表达NRASQ61H、NRASQ61R、NRASQ61K、NRASWT及过表达NRAS的多发性骨髓瘤细胞模型;3.应用NRAS抗体Western Blot及q-PCR技术检测NRASQ61H、NRASQ61R、NRASQ61K、NRASWT及过表达NRAS的多发性骨髓瘤细胞中主要下游信号、凋亡相关蛋白及与MM代谢、增殖相关转录因子c-Myc、IRF4的表达;4.利用NRAS抗体流式细胞术检测经蛋白酶体抑制剂硼替佐米、RAF抑制剂达拉非尼、MEK抑制剂比美替尼、硼替佐米联合达拉非尼或比美替尼处理后,NRAS过表达及Q61突变骨髓瘤细胞的凋亡比率;5.利用NRAS抗体Western Blot技术检测NRAS Q61突变骨髓瘤细胞经硼替佐米、达拉非尼、比美替尼、硼替佐米联合达拉非尼或比美替尼处理后,RAF-MEK-ERK信号途径磷酸化蛋白及凋亡相关蛋白的表达水平;6.应用流式细胞术检测上述细胞系在不同营养条件下的凋亡比率;7.利用Agilent Seahorse XF能量代谢检测技术检测上述细胞系糖酵解能力及氧化磷酸化水平;8.采用转录组测序技术对糖酵解水平明显升高的NRASQ61K突变骨髓瘤细胞进行转录组测序,并与表达野生型NRAS的骨髓瘤细胞进行显著差异基因分析;9.利用sh RNA技术敲减NRASQ61K突变骨髓瘤细胞中显著上调的基因,进一步检测其代谢改变及对硼替佐米的反应;10.利用Western Blot技术检测基因敲减后,NRASQ61K突变骨髓瘤细胞中与糖酵解相关的蛋白及转录因子的表达水平。
参考文献
[1]Inhibition of theʟ-glutamine transporter ASCT2 sensitizes plasma cell myeloma cells to proteasome inhibitors[J].Prelowska Monika K.;Mehlich Dawid;Ugurlu M.Talha;Kedzierska Hanna;Cwiek Aleksandra;Kosnik Artur;Kaminska Klaudia;Marusiak Anna A.;Nowis Dominika.Cancer Letters,2021
[2]Glycolysis-induced drug resistance in tumors—A response to danger signals?[J].Marcucci Fabrizio;Rumio Cristiano.Neoplasia,2021
[3]Pan RAS-binding compounds selected from a chemical library by inhibiting interaction between RAS and a reduced affinity intracellular antibody[J].Tanaka Tomoyuki;Thomas Jemima;Van Montfort Rob;Miller Ami;Rabbitts Terry.Scientific Reports,2021
[4]The molecular make up of smoldering myeloma highlights the evolutionary pathways leading to multiple myeloma[J].Boyle Eileen M.;Deshpande Shayu;Tytarenko Ruslana;Ashby Cody;Wang Yan;Bauer Michael A.;Johnson Sarah K.;Wardell Christopher P.;Thanendrarajan Sharmilan;Zangari Maurizio;Facon Thierry;Dumontet Charles;Barlogie Bart;Arbini Arnaldo;Rustad Even H.;Maura Francesco;Landgren Ola;Zhan Fenghuang;van Rhee Frits;Schinke Carolina;Davies Faith E.;Morgan Gareth J.;Walker Brian A..Nature Communications,2021
[5]杨洪梅.NRAS~（Q61）突变对多发性骨髓瘤作用及机制的研究[D].吉林大学,2022.