背景[1-3]
大鼠抑制素βA(INHβA)ELISA试剂盒是一种通过酶联免疫技术（Elisa）原理特异性识别样本中大鼠抑制素βA(INHβA)的商品化试剂盒。大鼠抑制素βA(INHβA)ELISA试剂盒可以通过识别样本中大鼠抑制素βA(INHβA)的类别及含量为科研及临床诊断提供依据。
需要注意的是若用于临床诊断的Elisa试剂盒需取得上市所在国的医疗器械资质。同时大鼠抑制素βA(INHβA)ELISA试剂盒的诊断结论存在一定的局限性，受限于样本保存不当、实验操作不规范，方法学灵敏度等原因不能作为临床判断的唯一依据。
大鼠抑制素βA(INHβA)ELISA试剂盒技术原理：ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)方法的基本原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。此种酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型，出现颜色反应。因此，可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定，这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来，使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法。
大鼠抑制素βA(INHβA)ELISA试剂盒
大鼠抑制素βA(INHβA)ELISA试剂盒样品收集、处理及保存方法:
1.血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5.保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
大鼠抑制素βA(INHβA)ELISA试剂盒操作流程如下:
(1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
(2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的抗体工作液100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB显色液100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
(12)分别测450nm吸光值W1和630nm吸光值W2,测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的OD值后,计算S/N值。
应用[4][5]
大鼠抑制素βA(INHβA)ELISA试剂盒可以用于抑制素A对猪卵泡颗粒细胞增殖和卵母细胞体外成熟的影响
抑制素（inhibin）是由雌性动物卵巢和雄性动物睾丸分泌的糖蛋白异二聚体，属于TGFβ超家族一员，α(INHA)和βA（INHβA）亚基构成抑制素A，α和βB(INHβB)形成抑制素B。在雌性动物体内，抑制素主要通过内分泌途径抑制垂体合成和分泌FSH，调节卵泡发育、配子发生和激素分泌。在卵巢局部，抑制素还可以通过自分泌和旁分泌作用调节卵母细胞-颗粒细胞同步发展。动物发情周期中，外周血液抑制素水平可以反应出卵巢上生长卵泡的数量，是决定动物卵泡发育和排卵的关键因素。目前关于抑制素对动物生殖影响的研究主要集中在利用抑制素进行动物免疫实验，而对细胞增殖、凋亡影响的研究则主要集中在生殖肿瘤细胞上。
以成年猪卵巢为材料，以卵泡颗粒细胞和卵母细胞为研究对象，进行卵泡颗粒细胞体外培养、卵母细胞体外成熟、孤雌激活和早期胚胎发育等一系列实验，探讨抑制素A对猪卵泡颗粒细胞类固醇激素合成、颗粒细胞增殖、凋亡、卵母细胞成熟的影响，另外还研究抑制素α亚基基因多态性与猪卵泡囊肿之间的联系。研究内容主要有以下几个方面：1.抑制素A对卵泡颗粒细胞类固醇激素合成的影响本研究分离猪卵泡颗粒细胞，利用FSHR及大鼠抑制素βA(INHβA)ELISA试剂盒进行免疫荧光实验对分离的细胞进行鉴定。免疫荧光结果显示：分离得卵泡颗粒细胞纯度在90%以上，满足后续实验要求。然后分别使用不同浓度（0、10、100、200ng/mL）的人源重组抑制素A和400ng/mL的抑制素α抗体处理体外培养的猪卵泡颗粒细胞，处理时间分为4个梯度，即12、24、48和72h。处理结束后提取RNA进行荧光定量。荧光定量结果显示，200ng/mL的抑制素A处理颗粒细胞48h，显著增加了颗粒细胞内FSHR、LHR、CYP11a1和STAR基因mRNA的表达(p<0.05)。ELISA方法（大鼠抑制素βA(INHβA)ELISA试剂盒）检测细胞培养上清中孕酮、INHβA和雌二醇的浓度，大鼠抑制素βA(INHβA)ELISA试剂盒结果显示，200ng/mL抑制素A作用48h显著提高了颗粒细胞中雌二醇的合成及分泌（p<0.05）。200ng/mL抑制素A处理颗粒细胞24h-48h可以显著抑制孕酮的分泌(p<0.05)，72h则表现为促进作用（p<0.05）。
参考文献
[1]Maternal serum analytes as predictors of IUGR with different degrees of placental vascular dysfunction[J].Amanda Roman;;Neeraj Desai;;David Krantz;;Hsiao‐Pin Liu;;Jonathan Rosner;;Nidhi Vohra;;Burton Rochelson.Prenat Diagn,2014(7)
[2]Different expression of PGE synthase,PGF receptor,TNF,Fas and oxytocin in the bovine corpus luteum of the estrous cycle and pregnancy[J].R.Sakumoto;;K-G.Hayashi;;T.Takahashi.Reproductive Biology.2014
[3]Novel aspects of the endocrinology of the menstrual cycle[J].Ioannis E.Messinis;;Christina I.Messini;;Konstantinos Dafopoulos.Reproductive BioMedicine Online.2014
[4]Role of PTGS2-generated PGE 2 during gonadotrophin-induced bovine oocyte maturation and cumulus cell expansion[J].Waleed F.Marei;;D.Robert E.Abayasekara;;D.Claire Wathes;;Ali A.Fouladi-Nashta.Reproductive BioMedicine Online.2014
[5]李万宏.抑制素A对猪卵泡颗粒细胞增殖和卵母细胞体外成熟的影响[D].吉林大学,2015.