背景[1-3]
CCT2抗体是一种可以特异性结合CCT2的人工合成抗体，可以靶向结合人、小鼠、大鼠和猪样品中的CCT2蛋白。CCT2作为含伴侣蛋白的T复合物(TRiC)的一个组成部分发挥作用，TRiC是一种复杂的分子伴侣复合物，对于通过ATP水解进行蛋白质折叠至关重要。这种多功能复合物在介导包括WRAP53/TCAB1在内的各种蛋白质的折叠中发挥着至关重要的作用，从而影响端粒的维持。此外，作为TRiC复合物的一部分，CCT2可能有助于BBSome的组装，BBSome是纤毛发生所必需的复合物，可调节囊泡向纤毛的运输。TRiC复合物参与肌动蛋白和微管蛋白的折叠，强调了其在细胞过程中的多方面功能（可能）。从结构上看，CCT2是TRiC复合物的关键组成部分，TRiC复合物是一种异源寡聚体组装体，其特征是两个堆叠的环，每个环的直径为12至16 nm。除了其结构作用之外，CCT2还与多种蛋白质相互作用，包括PACRG、FLCN和DLEC1，进一步凸显了其在多种细胞过程中的重要性。
CCT2抗体
CCT2抗体使用步骤（Western Blot）：
1.样本制备
1）融解RIPA裂解液（RIPA裂解液-细胞/组织裂解液缓冲液），混匀。
2）贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入150-250μL裂解液的比例加入裂解液。
3）充分裂解后，10000-14000g离心3-5min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
2.蛋白电泳
1）取出预制胶，将预制胶固定在电泳槽中，内槽加满tris-glycine电泳缓冲液。
2）在室温或不超过37℃的水浴中溶解5XSDS-PAGE上样缓冲液。水浴溶解后立即室温存放。
3）混合蛋白样品和5XSDS-PAGE蛋白上样缓冲液。
4）100℃或沸水浴加热3-5min，以充分变性蛋白，之后冷却至室温备用。
5）上样蛋白，并在1个孔中上样蛋白marker，盖上电泳槽盖，打开电源，电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。
6）电泳后取出胶板，用刀在侧边硅胶处，沿着两片玻璃缝隙切开硅胶，即可打开玻璃板；取胶时。
3.转膜与封闭
1）将胶浸于预冷的转膜缓冲液中平衡5min。
2）依据胶的大小剪取膜和滤纸6片，放入预冷的转膜缓冲液中平衡10min，如用PVDF膜，需参照说明书，先用纯甲醇浸泡1-2min，再孵育于预冷的转膜缓冲液中。
3）装配转移三明治：海绵/3层滤纸/胶/膜/3层滤纸/海绵，每层放好后，用试管赶尽气泡。
4）将转移槽置于冰浴中，放入三明治，膜靠近阳极，胶靠近阴极，加入转移缓冲液，插上电极，100V，1h（电流约为0.3A）。
5）转膜结束后，切断电源，取出膜。
6）将膜浸没在5mL丽春红染色液中，置于轨道摇床上室温染色5~10min或更长，直待膜上显示出蛋白条带。
7）清洗：取出膜，用蒸馏水，PBS或者其他适当溶液冲洗至背景清晰后拍照，大概冲洗2~3次，每次5min。
8）脱色：将膜放到0.1N NaOH溶液漂洗5min；倒去洗脱液，再重复一次。
9）清洗：再用蒸馏水清洗膜2~3次，每次5min。
10）将膜置于25mL封闭缓冲液中，在室温下孵育1小时。
11）用5mL TBST洗涤三次，每次15min。
4.抗体孵育与检测
1）将膜和一抗（CCT2抗体按照产品应用推荐稀释度）置于10mL一抗稀释缓冲液中在4℃下孵育过夜并不时轻轻晃动。
2）用5mL TBST洗涤三次，每次15min以去除残留的一抗(CCT2抗体)。
3）将膜和二抗（按照产品应用推荐稀释度）置于10mL封闭缓冲液中孵育1-2小时并不时轻轻晃动。
4）用5mL TBST洗涤三次，每次15min。
5）最后一次洗膜的同时，按照ECL超敏试剂盒说明书，新鲜配制发光工作液。
6）用平头镊取出膜，搭在滤纸上沥干洗液。将膜完全浸入发光工作液中，与发光工作液充分接触。室温孵育3min，准备立即压片曝光。但勿洗去发光液。
7）显影曝光。
应用[4][5]
CCT2抗体可以用于CCT2对肺腺癌细胞增殖、迁移的影响及其临床意义
探讨CCT2（chaperonin containning TCP1，subunit 2）在人肺腺癌中的表达、对肺腺癌细胞增殖、迁移生物学功能的影响及其与患者临床特征的关系。
方法：通过TCGA和GTEx数据库分析在肺腺癌组织及正常肺组织样本中CCT2的表达差异，生存分析评价其表达水平与患者预后的关系。CCT2抗体免疫组织化学法分别检测CCT2、Ki-67在72例肺腺癌组织中的表达水平，并分析其表达水平与临床病理特征之间的相关性。采用逆转录-聚合酶链反应（qRT-PCR）、CCT2抗体Western blot检测CCT2在肺腺癌细胞中的表达情况；A549、H1650、H1299细胞株分别转染siRNA，分为si-NC组和si-CCT2组，qRT-PCR、Western blot验证转染效率，CCK-8实验检测肺腺癌细胞增殖能力，细胞划痕实验检测细胞迁移能力。
结果：基于TCGA数据库的肺腺癌数据分析表明，与正常肺组织相比，肺腺癌组织中CCT2的表达水平更高，CCT2的高表达与肺腺癌患者的总体生存率降低相关（P＜0.05）。qRT-PCR、Western blot检测显示，CCT2在肺腺癌细胞中高表达，CCT2抗体免疫组化显示CCT2的表达与Ki-67表达呈正相关（P＜0.05）。CCK-8实验检测结果显示，A549、H1650细胞在转染siRNA 48 h后，相比si-NC组，si-CCT2组细胞增殖能力降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。细胞划痕实验结果显示，A549、H1650细胞在转染siRNA 24 h后，si-CCT2组细胞的迁移率低于si-NC组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：CCT2在肺腺癌细胞和组织中表达水平增加，敲低其表达可减弱A549、H1650肺腺癌细胞的增殖及迁移。
参考文献
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[4]WANG Q，HUANG W R，CHIH W Y，et al.Cdc20 and molecular chaperone CCT2 and CCT5 are required for the Muscovy duck reovirus p10.8⁃induced cell cycle arrest and apoptosis［J］.Vet Microbiol，2019，235：151-163
[5]何树燕，沈冬，林青凤，陈洁，马成龙.CCT2对肺腺癌细胞增殖、迁移的影响及其临床意义［J］.南通大学附属江阴医院肿瘤科,2023.