背景技术
阿司帕坦作为强甜味剂广泛应用于口服药物制剂、饮料和食品，为无毒物质。但是，应该注意，阿司帕坦可能产生具有潜在毒性的代谢物甲醇，天冬氨酸和苯丙氨酸。其中， 只有苯丙氨酸在阿司帕坦的正常摄取水平上产生的量较大，应加以关注。现有技术研究表明，在合成阿司帕坦的过程中，不可避免会生成一些杂质，其中就包括5-苄基-3，6-二氧-2-哌嗪乙酸。
因为最终要施用到人体上，因此本领域对控制药物原料的质量控制有着非常严苛的要求，其中就包括控制药用辅料的质量。如前所述，阿司帕坦作为常用的药用辅料，检测其中杂质的含量对控制其质量有着重要的意义。现有技术中（如中国药典2020版四部）并没有披露具体的方法，因此，如何检测阿司帕坦中5-苄基-3，6-二氧-2-哌嗪乙酸的含量是一个亟待解决的技术难题。
测定方法
采用高效液相色谱法：
稀释液：体积比为9:1的水‑甲醇溶液； 流动相：称取56g磷酸二氢钾，置容量瓶中，加820mL水溶解，用磷酸调节pH值至4.3，加甲醇稀释至刻度，摇匀； 标准品溶液：取5‑苄基‑3 ,6‑二氧‑2‑哌嗪乙酸标准品，加稀释液溶解并定量稀释制成每1mL含75µg的溶液； 供试品溶液：取阿司帕坦50mg，精密称定，置10mL量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；
色谱系统：用46mm×25cm，填充担体L1的色谱柱；检测波长为210nm；流速为2mL/min；柱温40℃；
系统适应性：取标准品溶液20uL，注入液相色谱仪，记录色谱峰：拖尾因子应不大于2.0，重复进样相对标准偏差不大于4.0%；
测定法：取标准品溶液与供试品溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图并测量主峰响应值，按下式计算阿司帕坦中5‑苄基‑3,6‑二氧‑2‑哌嗪乙酸的百分含量：含量= (ru/rs)×(Cs/Cu)×100，式中Cs为标准品溶液中5‑苄基3,6‑二氧‑2‑哌嗪乙酸的浓度，单 位为mg/mL；Cu为供试品溶液中阿司帕坦的浓度，单位为mg/mL；ru与rs为5-苄基-3，6-二氧-2-哌嗪乙酸在供试溶液与标准溶液中的峰面积。
参考文献
[1]扬州一洋制药有限公司. 一种测定阿司帕坦中5-苄基-3,6-二氧-2-哌嗪乙酸含量的方法:CN202011551493.X[P]. 2021-04-20.