盐酸替罗非班为一高效可逆性非肽类血小板表面糖蛋白(GPⅡb/MIa)受体拮抗剂,可阻止纤维蛋白原与糖蛋白IIb/Ia受体结合,从而阻断血小板的交联及血小板的聚集,是一种很有发展前途的抗血小板药,临床上与肝素联用,疗效确切,安全性好。该药原料及制剂在国内已有上市，但《中华人民共和国药典》尚未收载。L-N-丁基磺酰-P-羟基苯丙胺是盐酸替罗非班降解生成的一种杂质，本文以盐酸替罗非班注射液为研究对象,依据盐酸替罗非班注射液进口注册标准(JX20080265)和分析方法研究指导原则等,对盐酸替罗非班注射液中一个关键杂质L-N-丁基磺酰-P-羟基苯丙胺开展研究,建立了相应的分析方法,为盐酸替罗非班注射液的质量控制提供有效保障,以达到与原研安全一致。
检测方法[1]
1、色谱条件
色谱柱(YMC-Triart C18 4.6mmx250 mm,5 pum);流动相:0.01mol/L磷酸二氢钾溶液(磷酸调节pH值2.3)-乙腈(70:30,体积比),等度洗脱;流速1mL/min;检测波长227nm;进样量50uL。操作方法:按照《中华人民共和国药典》2020年版四部通则(0512)检测。
2、流动相选择
系统适用性溶液:取盐酸替罗非班对照品与杂质A对照品适量,分别精密称定,加水稀释溶解并制成每1mL中约含替罗非班25ug,L-N-丁基磺酰-P-羟基苯丙胺0.5ug的混合溶液;精密量取本品适量,用水稀释制成每1mL中约含替罗非班25ug的溶液,作为供试品溶液。采用进口注册标准(JX20080265)中的流动相检测进样供试品溶液,发现用不同品牌的C18色谱柱,主成分均在50min以后出峰,出峰时间较晚。因此,选择合适的色谱柱,调整流动相比例,最终确定流动相的比例为70:30,其它色谱条件不变。确定流动相比例之后,通过等度洗脱进样系统适用性溶液,主成分出峰时间合适,L-N-丁基磺酰-P-羟基苯丙胺和主峰的分离度符合规定。主峰保留时间为13.057min,杂质L-N-丁基磺酰-P-羟基苯丙胺为11.204min,分离度符合检测要求。
3、波长选择
通过二极管阵列检测器对主成分和已知杂质进行考察,发现主成分和已知杂质L-N-丁基磺酰-P-羟基苯丙胺均在227nm处有最大吸收,且辅料在此波长处无干扰,因此,采用227nm为检测波长。
参考文献
[1]崔芹芹,李发成,张贵民. 盐酸替罗非班注射液中杂质A分析方法的建立[J]. 山东化工,2022,51(11):142-146. DOI:10.3969/j.issn.1008-021X.2022.11.043.