简介
N-(2-溴乙基)-1,3-丙二胺二氢溴酸盐因其分子结构与警示结构的卤代烷烃相似，被国家食品药品监督管理总局药品审评中心归为潜在遗传毒性杂质，其检测方法主要是液相色谱法且报道较少。根据欧洲药物评审组织人用药品委员会《遗传毒性杂质限度指导原则》和人用药品技术要求国际协调理事会中关于基因毒杂质的相关要求及药物剂型和氨磷汀日用量规定，N-(2-溴乙基)-1,3-丙二胺二氢溴酸盐的控制限度为不得过0. 001‰。由于限度较低，一般的液相色谱法无法满足检测要求。现参照2020年版《中国药典》中四部通则0512液相色谱法和通则0431质谱法，采用液质联用法测定氨磷汀原料药中N-(2-溴乙基)-1,3-丙二胺二氢溴酸盐的含量[1]。
图1 N-(2-溴乙基)-1,3-丙二胺二氢溴酸盐的性状
合成
在氮气净化手套箱中，装有机械搅拌器、热电偶、氮气进口适配器和隔膜的3升4颈圆底烧瓶，充注2-（3-氨基丙基氨基）乙醇(144 g；1.22 mol)和磺烷(1.00 L；10.5摩尔)。这被带到通风柜，在那里它被连接到氮气线，隔膜被一个适配器取代，该适配器将1/8英寸直径的Teflon®管连接到HBr讲座瓶上。在搅拌过程中，溴化氢（HBr）气体以允许温度上升到约130°C的速率进入地下。在热演化停止，HBr不再被吸收后，停止添加；两个等价物发生了反应，生成了起始醇的二氢溴盐。将反应瓶上的适配器替换为含有三溴化磷（PBr3） （132 g, 0.487 mol， 1.2当量）的等压滴漏斗，在约110°至约130°C之间的温度下添加约10分钟。然后将溶液在120°C的氮气下搅拌20分钟，之后产品结晶成厚饼。添加额外的磺胺（380 mL），得到可在120°C下搅拌的浆液。一段时间后，热浆液通过3/8”聚丙烯管转移，并将其放入2l丙酮中，在4l烧杯中搅拌（三份大约相等）以沉淀产品。在每一部分之后，固体被过滤并用丙酮冲洗，烧杯中充入2l的新鲜丙酮用于下一部分。最后，用丙酮冲洗圆底烧瓶，所得固体与其他部分混合。通过氮气在过滤床上过夜干燥固体，得到标题化合物N-(2-溴乙基)-1,3-丙二胺二氢溴酸盐391 g （1.14 mol, 94%）淡黄色吸湿粉末[2]。
含量测定
采用LC－MS法测定氨磷汀原料药中N-(2-溴乙基)-1,3-丙二胺二氢溴酸盐的含量。样品用水溶解稀释，采用Waters CORTECSⓇT3色谱柱，流动相为0.1%七氟丁酸水溶液－0.1%七氟丁酸乙腈，梯度洗脱，柱温35 ℃ ，流速0.3 mL·min－1，进样量5 μL。质谱采用电喷雾正离子模式，多反应监测，检测离子对为m/z 181.0→136. 0。按外标法进行定量。结果 N － ( 2 －溴乙基) － 1，3 －丙二胺二氢溴酸盐的线性范围为10.17～203.31 ng·mL － 1 ( r = 0.9985) ，检出限为5.08 ng·mL－1，定量限为10.17 ng·mL－1,仪器的精密度和方法重复性的RSD均＜10% ;平均回收率为85.8% ，RSD = 2.9% ( n = 6) ; 3批样品中均未检出N-(2-溴乙基)-1,3-丙二胺二氢溴酸盐。充分证明所用方法简单、高效、重复性好，可用于检测氨磷汀原料药中N-(2-溴乙基)-1,3-丙二胺二氢溴酸盐的含量[1]。
参考文献
[1] 王倩,王雪芹,朱艳春,等. LC-MS法测定氨磷汀原料药中的N-(2-溴乙基)-1,3-丙二胺二氢溴酸盐 [J]. 华西药学杂志, 2023, 38 (04): 441-443. DOI:10.13375/j.cnki.wcjps.2023.04.018.
[2] Albemarle Corporation. Process for the preparation of (ω-aminoalkylamino)alkyl halides and their conversion to amifostine. World Intellectual Property Organization.