背景[1-3]
猪细小病毒(PPV)核酸试剂盒适用于检测呼吸道、消化道样本中的猪细小病毒，用于猪细小病毒感染的辅助诊断，其检测结果仅供参考，仅限科研用途。本产品不提供活体样品做阳性对照，仅提供人工合成的特异性DNA片段标准品作为阳性对照，仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗用途。
猪细小病毒病是由猪细小病毒(PPV)引起的一种猪繁殖障碍病，该病主要表现为胚胎和胎儿的感染和死亡，特别是初产母猪发生死胎、畸形胎和木乃伊胎，但母猪本身无明显的症状。
猪细小病毒(PPV)核酸试剂盒
猪细小病毒(PPV)核酸试剂盒检验原理：猪细小病毒(PPV)核酸试剂盒采用PCR技术，针对猪细小病毒的基因高度保守区域设计特异性引物，用PCR技术对猪细小病毒的核酸进行体外扩增检测，在反应体系中含猪细小病毒核酸模板的情况下，PCR反应进行特异性扩增，利用琼脂糖凝胶电泳技术对PCR扩增产物进行检测，依据特异性扩增片段的结果，判断待检样品中是否含有猪细小病毒源性成分，实现检测结果的定性分析。
猪细小病毒(PPV)核酸试剂盒适用仪器：ABI7500、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列荧光定量PCR检测仪。
样本类型：取可疑猪组织器官、死胎，或公猪精液；
猪细小病毒(PPV)核酸试剂盒操作流程
1.样本处理：组织样品：取可疑猪组织器官、死胎等1g，研磨，加入4mL的样品裂解液悬浮，冻融3次，5000r/min离心5min取上清液。或将组织磨碎后，加入4mL含10%小牛血清的Hanks液，冻融3次，5000r/min离心5min，取上清备用。公猪精液：采集2mL公猪精液，冻融3次备用。其他样品前处理可参考SN/T 1919-2016。
2.试剂配制：加入预混反应液、酶及模板，离心混匀。
3.扩增检测：运行预设程序（如：95℃预变性2min，95℃15s→60℃30s，45循环），分析Ct值。
猪细小病毒(PPV)核酸试剂盒结果判读：
阳性：检测通道Ct值≤40，且曲线有明显的指数增长曲线；
阴性：样本检测结果Ct值>40或无Ct值。
应用[4][5]
猪细小病毒(PPV)核酸试剂盒可以用于猪细小病毒4型和6型双重荧光定量PCR检测方法的建立及其分子流行病学调查
猪细小病毒（Porcine parvovirus,PPV）是造成母猪繁殖障碍的重要致病原之一,感染后可造成猪的死木胎综合征（stillbirth,mummification,embryonic death and infertility,SMEDI）,即母猪产死胎、木乃伊胎、胚胎发育不良和死亡及母猪不孕等。猪细小病毒4型和6型分别被发现于美国北卡罗来纳州和中国北京,可能为断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）、母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病综合征（PRDC）的潜在致病因子。目前,尚无一种能够同时针对PPV4和PPV6快速、准确、灵敏的检测方法被报道。因此,本研究旨在构建一种快速、准确、敏感的针对PPV4和PPV6的双重荧光定量PCR检测方法,以应用于临床上对PPV4和PPV6的快速检测。
研究通过构建的q PCR方法对福建地区规模猪场收集的临床表现为猪呼吸道疾病综合征以及繁殖障碍的样品进行检测,对PPV4和PPV6阳性样品进行全基因组测序,并作系统发育分析。以期了解福建地区PPV4和PPV6的毒株流行情况及其临床相关性,旨在丰富福建地区PPV4和PPV6分子流行病学数据,为PPV4和PPV6的防控提供理论依据。本研究根据PPV4和PPV6全基因组的保守区域基因序列,分别设计了2对特异性的引物和2种不同荧光基团标记的Taqman探针。经过条件优化,建立能够同时诊断PPV4和PPV6的双重荧光定量PCR方法,并对其特异性、灵敏性、稳定性以及与商品化的猪细小病毒(PPV)核酸试剂盒符合率进行试验评估。
结果显示,该方法能够同时检测鉴别PPV4和PPV6,且特异性良好,与猪伪狂犬病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、日本乙型脑炎病毒及猪细小病毒1型核酸均无交叉反应。本方法灵敏度高,对PPV4和PPV6的最小检出限分别为9.3 copies/μL和7.7copies/μL。组间和组内变异系数均未超过2%,具有良好的重复性。利用所建立的双重荧光定量PCR方法对福建省采集的88份猪血清及组织样本进行检测,PPV4阳性率为12.5%,PPV6阳性率为37.5%,该结果与猪细小病毒(PPV)核酸试剂盒符合率分别为90.9%和81.8%。利用猪细小病毒(PPV)核酸试剂盒鉴定的阳性样品通过本研究建立的方法复检时均未出现漏检。本研究建立的检测方法对PPV6和PPV4的鉴别诊断、病原监测、流行病学调查等具有重要意义。
参考文献
[1]Identification and genomic characterization of a novel porcine parvovirus in China[J].Guo Yajing;Yan Guangzhi;Chen Shengnan;Han Hui;Li Jiaming;Zhang Haoquan;Luo Shicheng;Liu Mingjie;Wu Qingqing;Li Qingxian;Tu Changchun;Huang Liangzong;Gong Wenjie.Frontiers in Veterinary Science.2022
[2]Prevalence of porcine parvovirus 1 through 7(PPV1-PPV7)and co-factor association with PCV2 and PRRSV in Korea[J].Kim Seung Chai;Kim Jae Hong;Kim Jae Yeob;Park Gyeong Seo;Jeong Chang Gi;Kim Won Il.BMC Veterinary Research.2022
[3]A Systematic Investigation Unveils High Coinfection Status of Porcine Parvovirus Types 1 through 7 in China from 2016 to 2020.[J].Li Jixiang;Xiao Yanzhao;Qiu Ming;Li Xinshuai;Li Shubin;Lin Hong;Li Xiangdong;Zhu Jianzhong;Chen Nanhua.Microbiology spectrum.2021
[4]High Co-infection Status of Novel Porcine Parvovirus 7 With Porcine Circovirus 3 in Sows That Experienced Reproductive Failure[J].Mai Jinhui;Wang Dongliang;Zou Yawen;Zhang Sujiao;Meng Chenguang;Wang Aibing;Wang Naidong.Frontiers in Veterinary Science.2021
[5]张鑫杰.猪细小病毒4型和6型双重荧光定量PCR检测方法的建立及其分子流行病学调查[D].福建农林大学,2023.