抗体稀释液是免疫实验中用于稀释抗体的专用溶液，常见于免疫组化（IHC）、免疫荧光（IF）和Western Blot（WB）等实验流程。其主要功能包括将抗体调整至合适的浓度、增强抗体的稳定性，并尽可能降低非特异性结合，从而提升实验结果的准确性和可重复性。
抗体稀释液的用途
首先，通过精确稀释抗体，使其达到适合实验的理想浓度，确保抗体与抗原能够高效结合。其次，稀释液中常含有蛋白类稳定剂，可有效维持抗体的生物活性，避免其在操作过程中降解或失活。此外，通过添加封闭蛋白（如BSA或血清），能够显著减少抗体与样本中非目标位点的结合，降低背景信号。
常见成分
常见的抗体稀释液通常包含以下几类成分：
缓冲体系（如PBS或Tris缓冲液）用于维持稳定的pH和离子环境；
蛋白质保护剂（如BSA或明胶）用于防止抗体聚集和失活；
防腐剂（例如叠氮钠或ProClin）用于抑制微生物污染；
以及甘油、吐温-20等辅助成分，用于提升溶液稳定性并减少抗体在管壁的吸附。
使用方法
在使用抗体稀释液时，需根据不同实验类型调整合适的稀释比例。例如，在免疫组化中，抗体通常稀释至1:50至1:1000；免疫荧光常用1:100至1:1000；而Western Blot则可能需要1:1000至1:5000的高倍稀释。操作时应先计算所需抗体和稀释液的体积，轻柔混匀以避免抗体变性，并尽量现配现用，以保持最佳反应活性。
使用过程中需注意多个方面。稀释液应严格按说明保存，常见为2–8℃冷藏或-20℃冷冻，并避免反复冻融。操作人员需穿戴实验服和手套，防止污染。使用前建议将稀释液平衡至室温，避免温度剧烈变化引起蛋白沉淀。此外，还须留意抗体与稀释液成分的兼容性，例如某些抗体对叠氮钠敏感，应选用不含该成分的稀释液。
实际应用中可能遇到部分常见问题。若稀释后抗体活性下降，建议检查稀释液是否含有足量稳定剂，并确认保存条件符合要求。如非特异性背景过高，可适当提高BSA或血清的浓度，或进一步优化抗体稀释比例。若出现沉淀，应确保抗体与稀释液温度一致，并避免剧烈振荡混匀。