简介
仙茅是石蒜科多年生草本植物，其药用部位为根状茎；仙茅中含有丰富的化学成分，如酚类、酚苷类、木脂素等，其中包括主要活性成分仙茅苷。仙茅苷是一种苯甲酸酯类衍生物，分子式为C22H26O11，相对分子质量为466.44，其单体标准品为白色结晶，可溶于温水、甲醇、乙醇、正丁醇、丙酮等，不溶于石油醚、已烷、乙醚。仙茅苷对学习记忆有改善作用，具有神经保护作用和成骨保护活性，并具有抗炎、抗氧化、増强免疫、对缺血/再灌注损伤的保护等药理作用[1]。
背景技术
仙茅为石蒜科植物仙茅Curculigo orchioides Gaerth.的干燥根茎。具补肾阳，强筋骨,祛寒湿的功效。用于阳痿精冷,筋骨痿软,腰膝冷痹,阳虚冷泻。仙茅中的主要有效成分为仙茅苷(curculigoside)。药理研究报道,仙茅苷能促进巨噬细胞的增生能力和吞噬作用,提高机体的免疫功能。现行药品标准未对仙茅中仙茅苷的含量作规定,不利于药品质量控制。仙茅苷的含量测定有TLC法和HPLC法，但样品前处理手续繁琐。仙茅的醇提液未经净化而直接进样，易损坏液相色谱柱。本文采用超声处理法提取仙茅苷,参照文献,提取液采用贯通式Sep-Pak C18固相萃取微柱净化,收集仙茅苷被固相萃取微柱饱和吸附后的流出液作供试液,用HPLC法测定仙茅苷含量。该法样品前处理简便快捷,不损失待测成分,不损害分析柱,测定结果准确可靠,可作为仙茅的质量控制方法。
测定方法[2]
1、对照品液制备
精密称取仙茅苷对照品10.8mg,加甲醇稀释至50mL,避光,冷藏(储备液),精取10mL,加流动相稀释至50mL得对照品液(0.0432mg•mL-1)。
2、精密度试验
仙茅苷对照品液25uL进样,重复5次,测得峰面积值,RSD为0.89%(n=5)。
3、稳定性试验
仙茅苷对照品液配制后即进样测定，1,2,3,4,5,6,7,24,25,28h各测定1次,测得峰面积值，RSD为0.84%(n=10),结果28h内测定结果稳定。
4、标准曲线
依次精密量取仙茅苷对照品液5,10,15,20,25,35,50uL进样，以仙茅苷进样量(ug)为横坐标,峰面积为纵坐标，得线性回归方程为Y=1.11061x107X-1.93x104，r=0.9999。
5、供试品液制备
精密称取粉碎的仙茅粗粉1g,置50mL量瓶中,加甲醇20mL,超声波振荡1h，加水至近刻度，放冷至室温,再加水至刻度,摇匀,离心5min(3000r•min-1),上清液注入Sep-Pak C18柱(柱的活化Sep-Pak C18微柱，依次注入10mL甲醇和10mL水,注入空气数次驱除柱内水),流速2~3mL/min，收集第6~8mL为供试品液。
6、重复性试验
同一仙茅粗粉5份,制备供试品液,25uL进样，测定仙茅苷含量,测定结果RSD为1.6%(n=5)。
7、回收率试验
已知仙茅苷含量样品约1g,精密称定,置50mL量瓶，加对照品储备液5mL,加甲醇15mL,制备供试品液,测得回收率分别为99.7%，96.9%，97.8%，101.7%，98.0%，100.8%，平均回收率为99.2%，RSD为1.7%(n=5)。
8、样品测定
每批样品取样3份(其中1批取样5份),制备供试品液,25uL进样(平行进样3次),测定仙茅苷含量见下表1。
参考文献
[1] 区卓怡,张咏,简荣杰,等. 仙茅苷药理作用机制的研究进展[J]. 广东化工,2023,50(5):117-119. DOI:10.3969/j.issn.1007-1865.2023.05.037.
[2] 陆惠文,朱炳辉,梁颖康. 高效液相色谱法测定仙茅中仙茅苷的含量[J]. 中国中药杂志,2002,27(3):192-194.