背景技术
索马鲁肽是一种胰高血糖素样肽‑1(GLP‑1)受体激动剂，通过介导GLP‑1受体，以葡萄糖依赖的方式，促进胰岛素分泌，抑制胰高血糖素分泌，从而达到降糖目的，常用于治疗成人II型糖尿病。索马鲁肽的长效机制是基于对结构的修饰，把肽链第26位的赖氨酸位置连接上18碳脂肪二酸侧链，修饰的碳链增大了索马鲁肽的分子量，并且对白蛋白的亲和力增强5‑6倍，避免快速被肾脏清除并防止代谢性降解，延长体内半衰期。索马鲁肽中间体29肽【CAS号：1169630‑82‑3】，又名司美格鲁肽29肽主链、Semaglutide Intermediate P29、GLP‑1(9‑37)，是索马鲁肽原料药合成的关键中间体。目前主要通过发酵制备索马鲁肽中间体29肽，得到的索马鲁肽中间体29肽会产生一些列杂质，这些杂质将增加索马鲁肽成品纯化的难度、影响成品的质量。
目前，常使用高效液相色谱法检测供试品溶液中有关物质的含量。专利申请CN117805269A公开了一种司美格鲁肽注射液有关物质的检测方法，其以磷酸盐溶液稀释司美格鲁肽注射液，得供试品溶液；以十八烷基硅烷键合硅胶填料色谱柱为固定相，以磷酸盐缓冲液‑乙腈为流动相A，以乙腈-异丙醇水溶液为流动相B，采用高效液相色谱法检测所述供试品溶液中司美格鲁肽注射液有关物质的含量。但该方法检测速度慢，且司美格鲁肽与索马鲁肽中间体疏水性差异大，不适宜分析索马鲁肽中间体中的有关物质。 目前，尚未公开索马鲁肽中间体有关物质的分析方法。
因此，有必要开发出一种方法简单、成本低、专属性和精密度好、灵敏度高、耐用性好的检测索马鲁肽中间体有关物质的分析方法。
检测方法[1]
一、溶液配制
稀释液的配制：称取三羟甲基氨基甲烷12.1g，加入乙腈100mL及适量水使溶解后，用水稀释至1000mL，用盐酸调pH至8.0，混匀，即得。空白溶液的配制与稀释液相同。
流动相A的配制：称取高氯酸钠9.8g，加入乙腈100mL及适量水溶解后，用水稀释至1000mL，用磷酸调节pH到1.7，混匀，即得。
流动相B的配制：取乙腈600mL、甲醇200mL与水200mL，混匀，即得。
索马鲁肽中间体对照品溶液的配制：称取25mg索马鲁肽中间体对照品至50mL容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，混匀，即得。平行配制两份，分别作为对照品溶液和检查对照品溶液。
索马鲁肽中间体供试品溶液的配制：称取25mg索马鲁肽中间体供试品至50mL容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，混匀，即得。
杂质混合溶液的配制：取杂质1、杂质2、杂质3、杂质4、杂质5、杂质6、杂质7、杂质8、杂质9、杂质10、杂质11、杂质12、适量，精密称定，用稀释液溶解并稀释制成每1mL含杂质1为6.25μg、杂质2为2.5μg、杂质3为2.5μg、杂质4为2.5μg、杂质5为5μg、杂质6为6.25μg、杂质7为1.25μg、杂质8为2.5μg、杂质9为2.5μg、杂质10为2.5μg、杂质11为35μg、杂质12为1.25μg 的溶液。
索马鲁肽中间体标记供试品的配制：称取25mg索马鲁肽中间体供试品至50mL容量瓶中，加杂质混合溶液10mL，用稀释液溶解并稀释至刻度，混匀，即得。
二、色谱条件
模式：LC；波长：UV 214nm；色谱柱：Agilent Poroshell 120EC‑C18，2.7μm，3mm×150mm；流速：0.6mL/min；进样量：10μL；柱温：40℃；自动进样器温度：5℃。
三、检测结果
取10μL索马鲁肽中间体标记供试品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，如图所述，标记供试品溶液中测得杂质1+杂质6为0.46％、杂质2为0.09％、杂质3为0.10％、杂质4为0.20％、杂质5为0.19％、杂质7+杂质12为0.09％、杂质8为0.10％、杂质9为0.08％、杂质10为0.12％、 杂质11为1.36％。
参考文献
[1]南京汉欣医药科技有限公司. 一种司美格鲁肽中间体29肽有关物质的分析方法:CN202411926385.4[P]. 2025-04-25.