5,10-亚甲基四氢叶酸(非对映体混合物)的核心形式是5,10-亚甲基-(6R,S)-四氢叶酸，包含天然活性的(6R)型和非天然的(6S)型两种非对映异构体，它兼具特殊的理化性质，且在医药、生物研究等领域应用广泛。
制备方法[1]
(1)叶酸还原成四氢叶酸：将30g叶酸，200g水放入1000ml四口瓶中，搅拌均匀，加入18％氢氧化钠溶液30g，使叶酸完全溶解；然后将30g硼氢化钠加入到100g水中，搅拌均匀，用恒压滴液漏斗缓慢加入到叶酸体系中，后升温至60℃，反应2h，后降温至0～10℃，用 浓盐酸调节ph为3～5，得类白色固体，抽滤，得到四氢叶酸固体32g。
(2)四氢叶酸甲酰化得到5,10‑亚甲基四氢叶酸盐酸盐：将步骤1得到的四氢叶酸固体加入70g水中，用稀盐酸调pH为1左右，使完全溶解，加入甲酸甲酯(含量≥95％，密度为0.974g/mL)2.6g，常温(20～25℃)反应1.5h，后升温至60℃，加入甲酸100g，三氟乙酸10g， 反应1h，50℃下‑0.097MPa旋蒸多余的甲酸1h，得到中间体5,10-亚甲基四氢叶酸(非对映体混合物)，往浓缩液中加入0.5mol/L HCl溶液100g，常温搅拌2h，抽滤，得到5,10-亚甲基四氢叶酸(非对映体混合物)盐酸盐固体27.8g，通过液相检测5,10-亚甲基四氢叶酸(非对映体混合物)盐酸盐的纯度为96.9％(其色谱图结果参照图)。
有机应用
1、专利CN202210247880.7提供一种亚叶酸钙的制备方法，包括：首先将作为原料的叶酸还原得到还原产物四氢叶酸，然后四氢叶酸发生甲酰化反应得到5,10-亚甲基四氢叶酸(非对映体混合物)，再与盐酸成盐为5,10‑亚甲基四氢叶酸盐酸盐，之后将5,10‑亚甲基四氢叶酸盐酸盐水解后再与钙盐生成亚叶酸钙；其中，在所述四氢叶酸发生甲酰化反应得到5,10-亚甲基四氢叶酸(非对映体混合物)中，在低温时加入甲酸甲酯与四氢叶 酸反应，然后升温加入甲酸，继续反应；本发明通过采用两种甲酰化试剂进行甲酰化反应，降低了反应温度，减少了甲酸用量及减压浓缩时间，提高了中间体5,10-亚甲基四氢叶酸(非对映体混合物)的纯度，进而提高了亚叶酸钙的质量[1]。
2、专利CN201510718571.3前期步骤可制备5,10-亚甲基四氢叶酸(非对映体混合物)，后续经拆分得到左旋异构体。制备核心步骤为：在惰性气体保护下，用硼氢化钠还原叶酸，调pH 3-4析出并干燥得到四氢叶酸；再将四氢叶酸溶于含三氟乙酸的无水甲酸液中，经旋蒸、析晶等操作得到5,10-亚甲基四氢叶酸甲酸盐，此甲酸盐即为非对映体混合物形式。该方法强调惰性气体氛围全程保护，有效避免了产物氧化降解，为制备高纯度的非对映体混合物提供了工艺保障[2]。
参考文献
[1]河北冀衡药业股份有限公司. 一种亚叶酸钙的制备方法:CN202210247880.7[P]. 2022-06-07.
[2]天津药物研究院药业有限责任公司. 左旋5，10-亚甲基四氢叶酸的制备方法:CN201510718571.3[P]. 2016-03-16.