顺式-已二烯二酸的合成新工艺

顺式-已二烯二酸又称顺式-2,4-己二烯二酸或顺，顺-粘康酸，是一种重要的有机化合物。浅棕色粉末，它是肺炎克雷伯菌的代谢中间体，可转化为己二酸和对苯二甲酸，这两种物质是合成聚合物的重要单体。顺式-已二烯二酸作为己二酸前体，可用于合成尼龙-6,6等塑料和聚合物。

制备方法^[1]

1、酶的制备

产邻苯二酚1,2-双加氧酶的菌株为假单胞菌(Pseadmonas sp.)一般在5℃以下保存。使用时首先在牛肉汁洋菜斜面上活化，在30℃温箱中，培养24小时，然后将斜面菌种接在种子瓶中，在30℃摇床上培养24小时，得到种子液。在摇瓶中加30%体积的培养基，再加种子液，在30°C摇床上培养72小时，即得到邻苯二酚1，2-双加氧酶的酶液。发酵液培养基的百分比组成为:苯甲酸钠0.15、琥珀酸钠0.27、KH₂PO₄0.2、Na₂HPO₄0.2、(NH₄)SO₄0.1、微量Mg²⁺、Ca²⁺、Fe²⁺和Mn²⁺。

2、固定化酶的制备

将以上邻苯二酚1，2-双加氧酶的酶液调至微酸性，将已活化的固定化载体按4-6%(W/V)加入，在室温下搅拌1-2小时，酶即挂到载体上制成了固定化酶。这一步的酶活收率为85-90%。

3、顺式-已二烯二酸的酶法合成

将上述固定化酶装在柱子中，通过循环泵将柱与底物溶液槽相连，如图1所示。底物溶液中包含邻苯二酚和缓冲液，PH为中性。通过循环泵使底物溶液通过固定化酶柱，在酶的催化下，邻苯二酚转化为顺式-已二烯二酸，多循环几次，该反应就进行完全了。将此产物溶液经浓缩和干燥后，可得粉末状顺式-已二烯二酸样品。也可将其溶于乙醇，形成顺式-已二烯二酸结晶。上述固定化酶反应是批式的，一批原料反应完了，还可进行下批反应，可多次反复反应。该固定化酶可使用3-5天。

参考文献

[1]中国科学院微生物研究所. 酶法合成顺，顺-己二烯二酸新工艺:CN93108610.8[P]. 1994-05-18.