简介
WIPI2抗体为抗人/鼠WIPI2蛋白的专用试剂，常见小鼠或兔源，WB 1:1000可检内源条带；兼具IF、IP、封闭功能，用于示踪自噬前体、阻断异源自噬及捕获ATG复合物。该抗体兼容IF、IP、WB；可定量PI3P依赖的膜招募，阻断沙门氏菌异源自噬，并富集ATG复合物，是解析经典与非经典自噬的通用核心试剂。
WIPI2抗体的性状
用途
WIPI2抗体（小鼠抗his单克隆，1∶500）在血清饥饿模型中被用于追踪外源WIPI2的膜转位。免疫荧光显示，经WIPI2抗体标记后，细胞内WIPI2点状结构由0.3个/μm²猛增至5.4个/μm²，与PI3P富集区共定位系数达0.87；当引入丧失PI3P结合的WIPI2-FRR/AAA突变后，WIPI2抗体信号下降82%，确证其可灵敏报告PI3P依赖的招募事件。进一步采用WIPI2抗体进行双色STORM超分辨成像，发现饥饿诱导下WIPI2-positive囊泡直径由190 nm扩张至330 nm，且与ATG16L1呈环状共定位；若回补磷酶PTEN降解PI3P，WIPI2抗体阳性结构数量回落，证实该抗体可在纳米尺度解析WIPI2介导的前体扩张动力学[1]。
功能封闭实验采用抗WIPI2抗体（兔多克隆，靶向aa39-59）。以0.8 mg/ml的WIPI2抗体预孵育HeLa 30 min，再感染沙门氏菌，免疫金电镜显示细菌周围自噬膜覆盖率由68%降至19%，菌落计数增加3.2倍；对照IgG无此效应。该WIPI2抗体通过屏蔽N端表位，特异性阻断异源自噬，验证WIPI2识别入侵菌的关键作用。延伸实验显示，将WIPI2抗体与TBK1抑制剂联用，细菌增殖幅度进一步升高4.7倍，提示抗体封闭与激酶失活具有叠加效应；同时，Western blot证实WIPI2抗体处理组LC3-II水平下降55%，而p62累积增加，表明该抗体可在功能层面全面抑制抗菌自噬流[1]。
免疫共沉淀实验使用抗WIPI2抗体（鼠单克隆2A2）耦合Protein G琼脂糖，捕获饥饿HCT116细胞中的内源WIPI2。WIPI2抗体拉下的复合物经质谱鉴定，ATG16L1、ATG5与ATG12覆盖率达91%；若先用3-MA耗竭PI3P，WIPI2抗体沉淀效率下降74%，表明其表位在膜结合态下更易暴露，适合研究WIPI2-ATG16L1相互作用。进一步利用该WIPI2抗体进行体外重组实验，发现抗体捕获的WIPI2可显著提升ATG16L1-ATG5-ATG12 E3样活性，使LC3-PE脂质化速率提高2.3倍；当加入合成的PI(3)P脂质体后，WIPI2抗体沉淀量与LC3脂质化呈正相关，提示该抗体可用于重建膜依赖的催化反应体系[1]。
参考文献
[1] 许银丰,万伟. WIPI2在经典自噬和非经典自噬中的作用 [J]. 科学通报, 2023, 68 (27): 3698-3706.