蟾酥有效化学成分有蟾毒配基类（如乙型强心甾族类化合物）、蟾蜍毒素类（蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾素等）、蟾毒色胺（如类吲哚类生物碱）等。蟾毒它灵是蟾蜍毒素类中的蟾蜍二烯羟酸内脂类的其中之一。
药理研究
作为蟾酥单体的蟾毒它灵具有抗肿瘤的作用。李玮等人使用高浓度的蟾毒它灵（40µg/mL、80µg/mL、160µg/mL）处理急性早幼粒白血病L-60细胞和正常B淋巴细胞24h，实验结果表明，蟾毒它 灵具有显著抑制HL-60细胞增殖的作用，与对正常B淋巴细胞的抑制作用具有统计学意义的升高，并且通过形态学评估、调亡相关分子的蛋白质水平检测验证了其诱导调亡的作用。吴兴新等人使用1µmol/L的蟾毒它灵处理人胃癌细胞BGC-823细胞24h后，其抑制率即可达到60%以上，但对正常脾淋巴细胞无明显细胞毒性作用，并且通过调节caspase-3的表达诱导BGC-823细胞的调亡。高幸经体内外实验证明 了低浓度的蟾毒它灵可以抑制恶性胶质瘤的生长和增殖，并诱导其调亡。Zhang等人使用低浓度蟾毒它灵抑制了肝癌细胞HepG2细胞的增殖，并且可以逆转对多柔比星耐药的HepG2细胞的增殖作用，将细胞周期阻滞在G2/M期并诱导其调亡。蟾毒它灵还可以通过激活内质网应激通路诱导成骨细胞瘤细胞的调亡[1]。
提取研究
在早期,通过传统的柱分离方式或薄层色谱(TLC)方式很难将蟾蜍甾烯(bufadienolides)进行分离。Inoue等开展了制备液相色谱(HPLC)分离蟾毒它灵和华蟾毒它灵的研究。利用填充了Li-Chromprep Si-60的Lobar B柱可将这些蟾蜍毒素成功分离。
此后,Kamano等以疏水凝胶Sephadex LH-20及HP-cellulofine为载体利用新的色谱方法分离得到了蟾毒它灵,并考察了Sephadex LH-20及HP-cellulofine柱层析对包括蟾毒它灵在内的10种蟾蜍甾烯的分离效果。结果发现,利用n-hexane/CH2Cl2/MeOH(4:5:1),n-hexane/CHCl3/MeOH(4:5:1)和n-hexane/toluene/MeOH(3:2:1)作为洗脱剂可以使蟾蜍甾烯得到很好分离。确定了流速、载体粒径和柱长与分离效果的关系,此外还比较了Sephadex LH-20、HP-cellulofine的分离状况及与硅胶薄层色谱的关系。
在国内，杨秀伟等取蟾酥以甲醇回流提取，减压浓缩,得甲醇干浸膏，环己烷萃取后的剩余浸膏以水混悬后氯仿萃取,得氯仿萃取物,硅胶拌样,干法行硅胶柱色谱。用氯仿、氯仿-甲醇梯度洗脱，相关流份再干法拌样行硅胶小柱色谱,其中的一个流份经乙酸乙酯重结晶,得蟾毒它灵。张英等将中华大蟾蜍皮经95%乙醇冷浸,浸膏的石油醚萃取部位经硅胶柱层析,以石油醚-乙酸乙酯系统梯度洗脱,所得到的流份再通过反复硅胶柱、ODS反相柱、制备液相等手段分离,得到了包括蟾毒它灵在内的6个化合物。
随着研究的深入，一些蟾毒它灵的衍生物也陆续被发现。杨立宏等从蟾蜍皮中分离得到一个新的蟾蜍毒素,为蟾毒它灵3-丁二酰精氨酸酯。Shimada等从台湾蟾蜍、黑眶蟾蜍的皮肤中分离得到包括蟾毒它灵-3-辛二酰-L组氨酸、-3-甲基组氨酸、-1-甲基组氨酸酯等五个新的蟾蜍毒素[2]。
参考文献
[1] 李玮. 蟾毒它灵诱导急性髓系白血病HL-60细胞凋亡机制的实验研究[D]. 陕西中医药大学,2019.
[2] 于垂亮,侯惠民. 蟾毒它灵的研究进展[J]. 天然产物研究与开发,2012,24(2):280-283. DOI:10.3969/j.issn.1001-6880.2012.02.030.