背景及概述
分离液是一类具有特定密度、渗透压与化学惰性的无菌溶液，核心用于密度梯度离心，实现混合体系中细胞、生物大分子或颗粒的高效分离，广泛应用于生物医学、生物技术及临床诊断领域。
应用
分离液最主流用途是细胞分离[1]，尤以人外周血单个核细胞（PBMC）分离为代表。其密度通常为1.077g/mL（20℃），与淋巴细胞、单核细胞密度匹配；红细胞与粒细胞密度更高（约1.092g/mL），离心后沉于管底，血小板密度更低（1.030–1.035g/mL），悬浮于上层，从而实现PBMC的高纯度富集。
在免疫学研究中，分离液用于获取T/B/NK细胞，开展亚群分析、功能检测与表面标记鉴定。在临床诊断中，用于制备淋巴细胞参考品，支撑流式检测试剂的质量评价；肿瘤学领域可富集循环肿瘤细胞，提升细胞学检测灵敏度。在细胞治疗中，如CAR-T制备，分离液是从患者血液中分离T细胞的关键试剂，为后续基因修饰与回输奠定基础。此外，还用于骨髓、脐带血干细胞分离，以及细胞器、病毒颗粒的纯化。
制备方法
以最常用的Ficoll‑Hypaque分离液为例，核心成分为聚蔗糖与泛影葡胺，制备流程如下：称取60gFicoll400，加入800mL无菌去离子水，室温搅拌至完全溶解，定容至1L，得6%Ficoll溶液，密度约1.020g/mL。取340g/L泛影葡胺溶液，按比例滴加至Ficoll溶液中，边加边搅拌，20℃下校准密度至1.077±0.001g/mL。用0.22μm滤膜过滤除菌，添加0.01%叠氮钠或50μg/mL庆大霉素防腐，4℃避光储存，有效期6–12个月。Percoll分离液（硅胶颗粒包被PVP）适用于高密度细胞（如红细胞、肿瘤细胞）分离，通过调节Percoll与缓冲液比例，配制1.050–1.130g/mL梯度液，高压灭菌后使用。
图1 分离液制备示意图
分离液凭借精准密度调控、生物相容性好、操作简便等优势，成为生命科学领域的基础工具。其制备关键在于密度精准校准、无菌控制与稳定性优化。随着细胞治疗与精准医学发展，分离液正向无动物源、低内毒素、定制化密度方向发展，以满足更高标准的科研与临床需求。
参考文献
[1]Lawton, Philippe; Mancassola, Roselyne; Naciri, Muriel; Petavy, Anne-Francoise.Use of Percoll for the infection of cells in vitro with Cryptosporidium parvum oocysts.[J]Journal of Microbiological Methods, 2001, vol. 46, # 1, p. 81 - 84, 10.1016/S0167-7012(01)00265-2(opens in a new window)