帕拉米韦是一个新颖的环戊烷类抗流感病毒药物,是继扎那米韦(Zanamivir)和奥司他韦(0seltamivir)研发成功并于1999年上市之后的又一新型流感病毒NA抑制剂。2013年4月5日,国家食品药品监督管理总局批准了抗流感新药帕拉米韦氯化钠注射液,现有临床试验数据证明其对甲型和乙型流感有效。帕拉米韦杂质4即帕拉米韦对映异构体，化学名为(1R,2R,3S,4S)-3-[(1R)-1-乙酰胺-2-乙基丁基]-4-胍基-2-羟基环戊基-1-羧酸,分子式为C15Hz28N4O4,分子量为328.41,结构式如下所示:
反相高效液相色谱是一种常用的检测方法,采用非极性或相对极性较弱的固定相,以极性较强的溶剂作为流动相,常用于分离、检测非极性和极性较弱的化合物;反相高效液相色谱在现代液相色谱中的应用最为广泛,据统计，它占整个高效液相色谱应用的80%左右。本文的目的在于提供一种硫酸铜-L-异亮氨酸作为流动相的反相高效液相色谱法检测帕拉米韦杂质4[1]。
检测方法
a.制备帕拉米韦杂质4供试品溶液;
b.采用磷酸盐-硫酸铜-L-异亮氨酸缓冲液作为流动相的反相高效液相色谱对供试品溶液进行检测,具体检测条件如下:色谱柱柱温为20-50℃，优选25-40℃,最优选35℃，色谱柱固定相的填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，示差折光检测器温度为20-50℃，优选25-40°C,最优选35℃，流动相:磷酸盐-硫酸铜-L-异亮氨酸缓冲液-乙腈为流动相,进样量5~100μl,进样量优选10-50μl,最优选10μl、20μl或30μl。
结论
(1)本文使用硫酸铜-L-异亮氨酸作为流动相的反相高效液相色谱法检测帕拉米韦杂质4,能有效分离API中对映异构体峰;
(2)本文对检测过程中的硫酸铜-L-异亮氨酸浓度和液相色谱操作参数进行了优化选择,使检测时间短,同时保证检测的特异性、准确度和灵敏度[1]。
参考文献
[1]南京正济医药研究有限公司. 一种帕拉米韦手性异构体的检测方法:CN202011114364.4[P]. 2022-04-22.