多聚-D-赖氨酸氢溴酸盐（PDL）为白色冻干粉末，易溶于水，-20℃避光保存；是一种由D-赖氨酸单体聚合而成的阳离子多肽，因其独特的生物相容性和正电荷特性，在医药领域被广泛用作细胞培养基底涂层材料，可显著促进神经细胞、成纤维细胞等贴壁依赖性细胞的黏附与生长；在材料科学中，它作为功能化涂层用于生物传感器和药物递送系统，通过静电吸附实现可控释放。李佳等人探讨多聚-D-赖氨酸氢溴酸盐在辅助悬浮细胞转染及集落形成实验中的应用。
应用研究
1、选择人源弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）细胞株SU-DHL-4。采用CCK-8法检测不同浓度（0.01、0.1、1.0、10.0mg/ml）多聚-D-赖氨酸氢溴酸盐溶液对SU-DHL-4细胞的毒性，计算细胞存活率。
2、将形态正常、处于对数生长期的SU-DHL-4细胞分别接种于包被多聚-D-赖氨酸氢溴酸盐和未包被多聚-D-赖氨酸氢溴酸盐的96孔板中，选择感染复数（MOI）为50、100的病毒液分别感染细胞，观察细胞形态。
3、采用慢病毒感染法构建稳定转染荧光素酶基因的SU-DHL-4细胞模型，将感染后的SU-DHL-4细胞分为对照组（感染对照组病毒液）和实验组（感染携带荧光素酶基因的病毒液）；转染后的细胞持续在含嘌呤霉素的RPMI 1640完全培养液中培养；采用双荧光素酶报告基因试剂盒检测荧光强度。
4、使用多聚-D-赖氨酸氢溴酸盐包被的培养皿进行悬浮细胞的集落形成实验，分别使用含0.1%二甲基亚砜（DMSO）（对照组）、0.1 μmol/L依托泊苷（A组）和0.2μmol/L依托泊苷（B组）的RPMI 1640完全培养液培养，观察集落形成情况并计算集落形成率。
结果
1、SU-DHL-4细胞接种于0.01、0.1、1.0、10.0mg/ml多聚-D-赖氨酸氢溴酸盐包被的96孔板48 h后，细胞存活率分别为（98.1±1.6）%、（97.1±0.7）%、（91.7±1.5）%、（83.3±2.0）%，对照组（不加多聚-D-赖氨酸氢溴酸盐溶液）为（100.0±2.7）%；0.01、0.1mg/ml多聚-D-赖氨酸氢溴酸盐包被组分别与对照组比较，差异均无统计学意义（均 P>0.05）；1.0、10.0 mg/ml多聚-D-赖氨酸氢溴酸盐包被组分别与对照组比较，差异均有统计学意义（均 P<0.001）；10.0mg/ml多聚-D-赖氨酸氢溴酸盐包被组与1.0mg/ml多聚-D-赖氨酸氢溴酸盐包被组比较，差异有统计学意义（ t=5.80， P＝0.004）；故后续实验采用对SU-DHL-4细胞生长无明显毒性的0.1mg/ml多聚-D-赖氨酸氢溴酸盐包被培养皿。
2、接种于未包被多聚-D-赖氨酸氢溴酸盐培养皿的SU-DHL-4细胞悬浮生长；接种于包被0.1mg/ml多聚-D-赖氨酸氢溴酸盐培养皿的SU-DHL-4细胞贴于皿底呈单细胞平铺生长模式。将SU-DHL-4细胞接种于未包被多聚-D-赖氨酸氢溴酸盐的96孔板，使用MOI为50、100的病毒液感染细胞，转染失败；将SU-DHL-4细胞接种于多聚-D-赖氨酸氢溴酸盐包被的96孔板，原本悬浮生长细胞变为贴于皿底呈单细胞平铺生长模式，轻摇培养皿细胞未浮起，具有完整光滑的细胞膜结构。
3、经嘌呤霉素筛选后的实验组SU-DHL-4细胞荧光强度值是对照组SU-DHL-4细胞的106倍（26 903±248比252±11， t＝186.10， P<0.001），提示转染成功。与对照组比较，A组细胞集落较对照组少且小，B组几乎无集落形成；对照组、A组、B组集落形成率分别为（100±6）%、（48±5）%、0，A组、B组分别与对照组比较，差异均有统计学意义（ t值分别为11.13、28.53，均 P<0.001）。 结论:0.1mg/ml多聚-D-赖氨酸氢溴酸盐包被的培养皿能够提高悬浮细胞转染效率，并辅助悬浮细胞进行克隆形成试验[1]。
参考文献
[1]李佳,周建鹏,白鸥. 多聚D-赖氨酸在辅助悬浮细胞转染及集落形成实验中的应用[J]. 白血病·淋巴瘤,2024,33(9):528-533. DOI:10.3760/cma.j.cn115356-20240131-00018.