动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是一种慢性炎症性疾病，降脂联合抗炎治疗可降低其主要心血管事件的发生率。研究证实，巨噬细胞在AS的炎症反应过程中扮演了重要角色。研究结果显示，过表达脯氨酸/丝氨酸丰富的卷曲螺旋蛋白1(proline/serine-rich coiled-coil protein 1， PSRC1)可通过抑制巨噬细胞的炎症反应延缓AS的进展。PSRC1是由PSRC1基因编码的一种微管结合蛋白，其中一端可与发挥细胞支撑作用的微管蛋白结合以维持细胞骨架的稳定性，PSRC1的另一端与细胞内某种其他蛋白结合而抑制炎症反应，进而发挥抑制AS作用的假设，以寻找影响巨噬细胞炎症反应的新靶点，为防治AS提供新的思路[2]。PSRC1抗体是用于检测PSRC1蛋白的研究用抗体，广泛应用于科研和各项研究当中。
TMAO轴抑制AS的技术路线与PSRC1抗体读数
罗甜甜的论文构建了PSRC1-/-apoE-/-双敲除小鼠，从肠道菌群及其代谢产物角度阐明PSRC1的抗AS机制。使用PSRC1抗体，运用Western blot、RT-PCR、免疫组化及免疫荧光等实验方法，在细胞及动物模型上明确TMAO诱导下PSRC1的变化情况。明确PSRC1为胞浆蛋白、F4/80为胞膜蛋白，均不用进行破膜。其免疫印迹流程为，先将稀释成适量浓度的特异性蛋白一抗加入一抗稀释液中，与封闭后的PVDF膜于4 ℃共同孵育过夜，HRP标记的对应兔或鼠二抗孵育37 ℃孵育1 h，ImageJ软件进行灰度分析[1]。这为PSRC1抗体在巨噬细胞蛋白读数等场景的应用提供了方法[1]。
PSRC1在斑块中定位与TMAO抑制PSRC1表达的读证
在结果层面，以PSRC1抗体完成斑块内定位，斑块内PSRC1蛋白与F4/80的定位能大致重合，说明PSRC1主要位于斑块的巨噬细胞中，而胆碱饮食可减少PSRC1表达。此外，PSRC1免疫组化染色结果显示，PSRC1主要高表达于主动脉内膜及中层。随后在干预模型中证实，对小鼠腹腔巨噬细胞行RT-PCR及免疫荧光染色发现，相较于普食组，TMAO饮食组的小鼠腹腔巨噬细胞PSRC1 mRNA及蛋白表达均显著降低，有统计学差异[1]。这说明，TMAO可促进AS进展，同时抑制巨噬细胞PSRC1表达。在分子机制部分，运用油红O染色、免疫荧光、尼罗红染色等方法检测PSRC1敲除后小鼠AS的进展，使PSRC1抗体在血管组织中的染色判读与定量，以及TMAO—PSRC1因果链的蛋白层面证据，得到系统性呈现[1]。
PSRC1抗体对PSRC1—ANXA2互作的内源Co-IP与WB验证
用蛋白组学锁定PSRC1的结合伙伴为膜联蛋白A2(ANXA2)，并使用PSRC1抗体完成互作验证。论文指出，巨噬细胞过表达PSRC1可减缓动脉粥样硬化的进展，其机制可能与PSRC1与ANXA2的结合增加，抑制ANXA2释放至胞外，从而抑制炎性因子的释放有关[2]。在验证环节，使用ANXA2抗体对ox-LDL刺激24 h前后的RAW264.7细胞裂解液进行Co-IP实验，再采用PSRC1抗体或ANXA2抗体进行Western blotting检测。蛋白质组学结果为，用ox-LDL刺激后PSRC1与ANXA2的结合明显增加，且二者的结合具有特异性，免疫荧光实验也显示PSRC1与ANXA2在细胞内存在共定位现象。与对照组比较，ox-LDL组的ANXA2水平明显升高，与Ad-GFP+ox-LDL组比较，Ad-PSRC1+ox-LDL组的ANXA2水平明显降低。这显示PSRC1抗体同时胜任Co-IP与WB两类场景[2]。
选择与使用建议
选择PSRC1抗体之前，首先要明确实验需求，根据实验类型（WB, IHC, IF等）和样本种属，筛选在对应应用中经过验证且种属反应匹配的产品。同时需要关注验证数据与文献，优先选择在权威数据库中有明确验证评级，或在已发表文献中被使用过的抗体。使用PSRC1抗体时，要注意免疫原信息，了解抗体的免疫原序列（如针对N端、C端或内部区域）有助于预判其识别不同剪接变体或物种的能力。使用抗体时，务必设置阳性对照和阴性对照，以确认抗体的特异性和灵敏度。
参考文献
[1] 罗甜甜. 基于肠道菌群及其代谢产物探讨PSRC1抑制动脉粥样硬化的作用与机制研究[D]. 广州: 南方医科大学, 2022.
[2] 郭中州, 张亚南, 刘济尘, 等. PSRC1与ANXA2相互作用减缓动脉粥样硬化进展的作用机制[J]. 解放军医学杂志, 2021, 46(5): 440-447.