人胚肾细胞293T
一. 细胞起源
293T细胞源于人胚胎肾细胞，经腺病毒5（Ad5）DNA片段转化获得，并稳定表达SV40大T抗原（SV40 large T antigen），使其支持含有SV40复制起点的质粒高效复制[1]。
二. 生物学特性
1. 形态与生长特性
2. 遗传与分子特性
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SV40大T抗原：增强外源基因表达效率，促进质粒复制[1]。
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干细胞样表型：在无血清三维球体培养中，高表达ALDH1、CD44+/CD24-标志物，并上调β-catenin、Notch1等干细胞信号通路[3]。
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间充质转化倾向：三维培养时表达波形蛋白（vimentin）、Zeb1等间充质基因，可能增强转移潜能[3]。
3. 代谢与毒性响应
三. 培养与储存
1. 培养基：DMEM＋10% FBS＋1% P/S[2]。
2. 传代与冻存：常规胰酶消化传代；30%基础培养基+60%FBS+10%DMSO，液氮保存[2]。
3. 转染兼容性：脂质体转染效率高（如GFP载体转染成功率50–60%）[7][8]。
四. 研究应用领域
1. 基因功能与调控研究
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RNA干扰（RNAi）：广泛用于基因沉默（如p21WAF1/CIP1、PES1、HPIP基因），验证靶基因功能[9][10][11]。
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启动子活性分析：如尼罗罗非鱼β-actin启动子驱动EGFP表达[8]。
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蛋白互作研究：通过免疫共沉淀筛选互作蛋白（如C14orf166与RS8/EFCB/NRAP）[12]。
2. 疾病机制模型
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肿瘤研究：模拟癌干细胞表型，用于放疗抗性、转移机制探索[3]。
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代谢疾病：研究AMPK-脂联素通路（女贞苷激活AMPK）[4]。
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病毒感染：构建禽流感HA-GFP融合蛋白，分析信号肽对表达的影响[7]。
3. 药物筛选与载体开发
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抗肿瘤药物：评估化合物选择性（如共轭亚油酸抑制EC109癌细胞）[5]。
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基因载体：壳聚糖纳米粒转染pGFP，但存在细胞毒性[6]。
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慢病毒包装：HPIP siRNA慢病毒抑制HeLa/HepG2增殖[10]。
五. 近年研究进展
1. 自噬调控：弓形虫ROP17蛋白在293T中表达，促进血清饥饿诱导的自噬（LC3-II↑、P62↓）[13]。
2. 神经退行性疾病：帕金森研究中用于验证Parkin蛋白调控小胶质细胞NLRP3炎症体[14]。
3. 新型基因工具：构建双标签载体（如pcDNA3.1-Flag-His）用于蛋白互作组学研究[12]。
六. 局限性与克服方法
1. 局限性
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遗传不稳定性：长期传代可能累积突变，影响实验结果可重复性。
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非完全正常细胞：表达SV40抗原及间充质基因，不完全代表原代肾细胞[3]。
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转染毒性：壳聚糖纳米粒等载体导致细胞损伤（抑制率>26%）[6]。
2. 克服方法
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低代次使用：限制传代次数（<50代），定期鉴定细胞身份。
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替代载体：优化脂质体或病毒载体（如慢病毒）降低毒性[10]。
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三维培养模型：利用球体培养模拟体内微环境，提升生理相关性[3]。
七. 总结与展望
293T细胞因其高转染效率、快速增殖及SV40大T抗原特性，已成为分子生物学和疾病研究的核心工具。近年研究拓展至自噬、神经退行性疾病及新型基因编辑领域。未来方向包括：
1. 精准基因编辑：结合CRISPR-Cas9构建更复杂疾病模型。
2. 类器官整合：联合3D培养技术模拟器官微环境。
3. 毒性机制优化：开发低毒载体（如肽纳米粒）提升转染安全性。
参考文献
1. Viebahn, S. Die Rolle der Oberflächensialylierung bei der Modulation von Immunantworten. 2008.
2. 人胚肾细胞293T 说明书.武汉恩玑生命科技有限公司.
3. Characterizing cancer cells with cancer stem cell-like features in 293T cells. Debeb BG, et al. Cancer Res. 2010. [PMID: 20663901]
4. 郭文文, 等. 女贞苷通过激活AMPK促进脂联素的组装. 2018.
5. 吴演, 等. 海蓬子籽油亚油酸共轭化产物的抗肿瘤作用. 2012.
6. 王红梅, 等. 壳聚糖纳米粒基因载体的制备和体外转染实验研究. 2010.
7. 苏艳, 等. 信号肽序列对禽流感病毒H5N1 HA蛋白GFP融合分子表达的影响. 20010.
8. 邹芝英, 等. 尼罗罗非鱼β-actin基因启动子的分离及其在真核细胞中的活性验证. 2011.
9. 王朝云,等.利用RNA干扰抑制p21WAF1/CIP1基因的表达及周期阻滞效应[J].生物技术通讯,2008.
10. 徐小洁, 等. 慢病毒介导RNA干扰HPIP蛋白抑制肿瘤细胞增殖. 2011.
11. 李杰萍, 等.利用不同方法检测RNAi抑制人pescadillo基因的表达[J].细胞与分子免疫学杂志,2007.
12. 张登禄, 等.胰腺癌转移相关基因C14orf166的真核表达及其蛋白相互作用的蛋白质组学筛选[J].中国医药生物技术,2010.
13. 刘宏延, 等. 弓形虫ROP17真核表达载体的构建及ROP17参与自噬的研究. 2012.
14. Parkin regulates microglial NLRP3 and represses neurodegeneration in Parkinson's disease. Yan YQ, et al. Research. 2025.