线粒体呼吸链复合物II测定试剂盒/20样
测定原理:
线粒体 呼吸链复合物 II ,通常称为琥珀酸 -辅酶 Q 还原酶或琥珀酸脱氢酶( Succinate-Coenzyme Q Reductase ;Succinate Dehydrogenase),是线粒体电子传递链与三羧酸循环链接的载体:含有四个亚单位,包括共价结合的辅基黄素腺嘌呤二核苷酸(flavin adenine dinucleotide ;FAD) 和三个铁硫中心( Fe-S clusters),以及细胞色素 b 亚单位,其最特征性的酶活性是丙二酸钠敏感的琥珀酸-辅酶 Q 还原酶。
自备仪器用品:
比色皿、双波长分光光度仪、培养箱。
实验步骤:
实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化;缓冲液(Reagent A)室温预热;反应液(Reagent B)和底物液(Reagent D)注意避光。然后进行下列操作。
(一)、背景对照测定
1、移取 780 微升缓冲液(Reagent A)到新的比色皿
2、加入 100 微升反应液(Reagent B)
3、加入 20 微升底物液(Reagent D)
4、上下倾倒数次,混匀
5、放进 30℃培养箱里静置 3 分钟
6、加入 100 微升阴性液(Reagent C)
7、上下倾倒数次,混匀(限定在 3 秒之内)
8、即刻放进分光光度仪检测,此为背景空对照:600 波长读数 0 分钟-600 波长读数 1 分钟或 5 分钟
(二)、样品活性测定
1、移取 780 微升缓冲液(Reagent A)到新的比色皿
2、加入 100 微升反应液(Reagent B)
3、加入 20 微升底物液(Reagent D)
4、上下倾倒数次,混匀
5、放进 30℃培养箱里静置 3 分钟
6、加入 100 微升待测样品(注意:10 微克总线粒体蛋白)
7、上下倾倒数次,混匀(限定在 3 秒之内)
8、即刻放进分光光度仪检测,此为样品总活性读数:600 波长读数 0 分钟-600 波长读数 1 分钟或 5分钟。
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