线粒体呼吸链复合物I测定试剂盒/10样
测定原理:
线粒体呼吸链复合物 I,通常称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸辅酶 Q 还原酶(reduced nicotinamide adenine dinucleotide coenzyme Q reductase, NADH-CoQreductase), 又称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(reduced nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase;NADH dehydrogenase),是线粒体电子传递链中最大的结构成分:含有 30 至 40 多个多肽结构。其特征性的酶活性是鱼藤酮敏感的 NADH-辅酶 Q 还原酶(NADH:Q Reductase)。
自备仪器用品:
比色皿、培养箱、双波长分光光度仪。
实验步骤:
实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化;缓冲液(Reagent A)室温预热;反应液(Reagent B)和底物液(Reagent D)注意避光。然后进行下列操作。
(一)、背景对照测定
1、移取 780 微升缓冲液(Reagent A)到新的比色皿
2、加入 100 微升反应液(Reagent B)
3、加入 20 微升底物液(Reagent D)
4、放进 30℃培养箱里静置 3 分钟
5、加入 100 微升阴性液(Reagent C)
6、上下倾倒数次,混匀(限定在 3 秒之内)
7、即刻放进分光光度仪检测,此为背景空对照:(340 波长读数-380 波长读数)0 分钟-(340 波长读数-380 波长读数)1 分钟或 3 分钟
(二)、样品总活性测定
1、移取 780 微升缓冲液(Reagent A)到新的比色皿
2、加入 100 微升反应液(Reagent B)
3、加入 20 微升底物液(Reagent D)
4、放进 30℃培养箱里静置 3 分钟
5、加入 100 微升待测样品(注意:10 微克总线粒体蛋白)
6、上下倾倒数次,混匀(限定在 3 秒之内)
7、即刻放进分光光度仪检测,此为样品总活性读数:(340 波长读数-380 波长读数)0 分钟-(340 波长读数-380 波长读数)1 分钟或 3 分钟
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