线粒体呼吸链复合物IV测定试剂盒/20样
测定原理:
线粒体呼吸链复合物 IV ( Mitochondria Complex IV),又称为细胞色素 C 氧化还原酶( cytochrome c oxidoreductase)或细胞色素 C 氧化酶(Cytochrome c oxidase),存在于真核生物的细胞线粒体上,主要通过氧化磷酸化为细胞提供能量。呼吸链复合物 IV 是由 13 种不同的亚体构成的复合物,其中含有 2 个血红素(heme)基团(a 和 a3)和 2 个铜原子,作为辅基(prosthetic groups)。
自备仪器用品:
比色皿、培养箱、1.5毫升离心管。
实验步骤:
(一)、背景对照测定
1、移取 800 微升缓冲液(Reagent A)到新的比色皿。
2、加入 100 微升稀释液(Reagent C)。
3、上下倾倒数次,混匀。
4、室温静置 3 分钟。
5、加入 100 微升含有反应液(Reagent B)和稳定液(Reagent D)的工作液。
6、上下倾倒数次,混匀(限定在 3 秒之内)。
7、即刻放进分光光度仪检测,此为背景空对照:(0 秒读数-60 秒读数),正常读数差值为 0.001 至 0.005。
(二)、样品活性测定
1、移取 800 微升缓冲液(Reagent A)到新的比色皿。
2、加入 100 微升待测样品(注意:建议总量 2 微克线粒体蛋白)。
3、上下倾倒数次,混匀。
4、室温静置 3 分钟。
5、加入 100 微升含有反应液(Reagent B)和稳定液(Reagent D)的工作液。
6、上下倾倒数次,混匀(限定在 3 秒之内)。
7、即刻放进分光光度仪检测,此为背景空对照:(0 秒读数-60 秒读数),正常读数差值为正值。
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