大鼠Cathepsin Delisa试剂盒

商品属性

产品基本信息

| 检测种属 | 大鼠（Rat） |

| 应用样本 | 血清、血浆、组织匀浆液、细胞裂解液 |

| 检测原理 | 双抗体夹心法（Sandwich ELISA） |

| 灵敏度 | 通常为1.0 pg/mL - 10 ng/mL |

| 检测范围 | 15.6 pg/mL - 1000 pg/mL |

| 反应时间 | 2.5小时（孵育+显色） |

| 保存条件 | 试剂盒未开封：-20℃；开封后：2-8℃ |

| 有效期 | 12个月 |

试剂盒组分

| 组分 | 规格 | 数量 |

| 预包被抗大鼠Cathepsin D微孔板 | 96孔板（可拆卸） | 1块 |

| 标准品（重组大鼠Cathepsin D） | 冻干粉或溶液 | 2-4瓶 |

| 生物素标记检测抗体 | 1 mL | 1支 |

| Streptavidin-HRP酶结合物 | 1 mL | 1支 |

| 显色底物TMB | 10 mL | 1瓶 |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 10 mL | 1瓶 |

| 洗涤缓冲液（20X浓缩液） | 50 mL | 1瓶 |

| 样本稀释液 | 20 mL | 1瓶 |

操作步骤

样品准备：

- 血清/血浆：3000 rpm离心10分钟，取上清。

- 组织/细胞：裂解后离心取上清，用稀释液适当稀释。

标准品稀释：

将标准品梯度稀释（1000 pg/mL → 15.6 pg/mL）。

加样与孵育：

每孔加标准品/样本100 µL → 37℃孵育90分钟 → 洗板4次。

加检测抗体：

每孔加生物素化抗体100 µL → 37℃孵育60分钟 → 洗板4次。

加酶结合物：

每孔加Streptavidin-HRP 100 µL → 37℃避光孵育30分钟 → 洗板4次。

显色与终止：

加TMB底物90 µL → 37℃避光显色15-20分钟 → 加终止液50 µL。

读数：

用酶标仪在450 nm波长下测OD值（参考波长630 nm）。

数据处理

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线（推荐四参数拟合）。

根据样本OD值计算Cathepsin D浓度（需乘稀释倍数）。

注意事项& 常见问题 

关键提醒

样本稀释：高丰度样本需按说明预稀释（如组织匀浆稀释1:100），避免超出检测范围。

洗板彻底性：洗涤不充分可能导致假阳性。

显色时间控制：显色过久会致背景升高。

试剂回温：所有组分使用前需平衡至室温（25℃）。

干扰因素

溶血样本：血红蛋白 > 5 mg/mL 可能干扰结果。

脂血样本：离心后取透明上清液。

反复冻融：样本避免 >3次冻融，分装保存于-80℃。

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