芒硝探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 芒硝探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Natrii Sulfas Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5036 |
检测原理
基于实时荧光定量PCR（qPCR）探针法技术：
探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，探针与靶序列特异性结合。
信号释放：PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，使报告基团与淬灭基团分离，释放荧光信号。
定量分析：通过监测荧光强度增长（Ct值）实现靶序列的定性和定量检测。
产品特点
高灵敏度：优化的引物和探针可检测低至10^2拷贝/μL的靶序列。
高特异性：针对芒硝保守序列设计，无交叉反应。
即开即用：预混缓冲液、酶和引物探针，仅需提供RNA模板。
内置对照：含阳性对照（1×10^8拷贝/μL），区分假阴性结果。
适用范围：科研用途（非临床）。
试剂盒组成
| 成分 | 规格/体积 |
| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500 μL |
| qRT-PCR酶混合液 | 100 μL |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |
| 芒硝引物混合液 | 100 μL |
| 芒硝qPCR探针 | 50 μL |
| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50 μL |
| 说明书 | 1份 |
实验步骤
1. 标准曲线制备（6个梯度稀释）
使用阳性对照按10倍梯度稀释（10^2~10^7拷贝/μL），独立操作避免污染。
2. RNA提取
推荐使用柱式病毒RNA提取试剂盒，设置阴性/阳性对照。
3. qPCR反应体系（20μL）
| 成分 | 体积（μL） |
| qRT-PCR缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 探针 | 1 |
| 引物混合液 | 2 |
| RNA模板/标准品/对照 | 5 |
4. 反应程序
逆转录：50℃ 30分钟
预变性：94℃ 10分钟
扩增（40循环）：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集FAM信号）
数据分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性检测：
阳性：Ct≤35，扩增曲线明显起峰；
阴性：Ct≥40；
可疑（35<Ct<40）：需复测确认。
注意事项
操作分区进行（样本制备区、PCR区），避免气溶胶污染。
阳性对照最后加入，防止污染其他组分。
试剂解冻后需混匀，短暂离心后使用。
本产品仅限科研，严禁用于临床诊断。
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