检测原理
基于实时荧光定量PCR技术（qPCR），通过特异性探针（如TaqMan探针）与目标DNA结合，在扩增过程中释放荧光信号，实现靶序列的定性与定量检测。探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团（如NFQ），扩增时Taq酶切割探针使荧光信号增强。
产品名称
炙黄芪探针法PCR鉴定试剂盒
英文名称
Radix Astragali Preparata Probe-based PCR Identification Kit
产品规格
50T
产品分类
荧光定量PCR
检测类型
PCR检测
产品货号
PR4905
试剂盒组成
探针法qRT-PCR缓冲液（500μL）
酶混合液（50μL）
荧光PCR模板稀释液（1mL）
引物-探针干粉（50T）
阳性对照（10^7拷贝/μL，50μL）
qRT-PCR缓冲液（500μL）
酶混合液（100μL）
引物混合液（100μL）
探针（50μL）
阳性对照（1×10^8拷贝/μL，50μL）
操作步骤
标准曲线制备（以10倍梯度稀释为例）：
标记离心管（6-1号或7-2号），依次稀释阳性对照至10^6~10^1拷贝/μL，冰上保存。
样品DNA提取：
使用兼容的DNA提取试剂盒，建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC）。
PCR反应体系构建（20μL/反应）：
定量分析：需设置标准曲线管（6管）、样品管（N+2）、阴性对照（水）和阳性对照。
加入缓冲液、酶、引物、探针及模板DNA，避免气泡。
PCR扩增程序：
逆转录（若需）：50℃ 10-30分钟
预变性：95℃ 10分钟
40循环：95℃ 15秒 → 60℃ 30-60秒（采集FAM信号）
数据分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样品浓度。
定性检测：
阴性：Ct≥40或无扩增曲线；
阳性：Ct≤35或≤39，需复测临界值样本。
注意事项
防污染：分区分步操作，使用带芯枪头，实验后消毒台面（10%次氯酸或75%酒精）。
试剂保存：避免反复冻融，反应液避光。
局限性：
假阳性风险：交叉污染或阳性对照泄漏；
假阴性风险：样本降解、引物探针不匹配或操作误差。
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