小鼠源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 小鼠源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Mouse-derived Component Probe-based Real-time PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5333 |
检测原理
基于TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术：
探针设计：针对小鼠微小病毒（MVM）高度保守基因区域设计特异性引物及探针，探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。
信号释放：PCR扩增时，Taq酶切割探针，分离报告基团与淬灭基团，释放荧光信号，通过实时监测荧光强度实现定量分析。
应用范围：适用于科研领域的小鼠源性病毒核酸定性及定量检测，不可用于临床诊断。
产品特点
即开即用：用户仅需提供样本DNA/RNA模板。
高灵敏度与特异性：优化引物及探针，避免与其他病毒核酸交叉反应。
内置对照：含阳性对照（1×10^8拷贝/μL）和阴性对照，便于结果判读。
兼容性：支持主流荧光定量PCR仪（如ABI、Bio-Rad、LightCycler等）。
试剂盒组成
| 成分 | 规格（示例） |
| qPCR缓冲液 | 500μL |
| 酶混合液 | 100μL |
| 探针及引物混合液 | 50–100μL |
| 阳性对照 | 50μL（1×10^8拷贝/μL）|
| 模板稀释液 | 1mL |
| 说明书 | 1份 |
操作步骤
样本处理：
提取样本DNA/RNA（推荐使用商品化提取试剂盒）。
避免反复冻融，短期保存于-20℃，长期保存于-70℃。
标准曲线制备（定量检测需选做）：
将阳性对照按10倍梯度稀释（10^2–10^7拷贝/μL），独立操作以防污染。
PCR反应体系配制（20μL/反应）：
按比例混合缓冲液、酶、探针及模板，阴性对照以水替代模板。
扩增程序：
逆转录（若检测RNA）：50℃ 30分钟。
预变性：94℃ 10分钟。
扩增循环（40次）：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集荧光信号）。
结果分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性检测：
阳性：Ct值<35，呈S型扩增曲线。
阴性：Ct值≥38或无扩增。
可疑：35≤Ct值<38，需复检确认。
注意事项
分区操作（试剂配制、样本处理、扩增区），避免交叉污染。
使用带滤芯枪头，所有离心步骤需充分振荡混匀。
阳性对照需单独存放，严禁与其他组分接触。
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