α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)测定试剂盒/微量法/96样

α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)测定试剂盒/微量法/96样

测定意义：

α-KGDH（EC 1.2.4.2）广泛存在于动物、植物微生物和培养细胞的线粒体中，是三羧酸循环调控关键酶之一，催化 α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰辅酶 A。

测定原理：

α-KGDH 催化 α-酮戊二酸、NAD+  和辅酶 A 生成琥珀酰辅酶 A 、 二氧化碳和 NADH ，NADH 在 340 nm有特征吸收峰，以 NADH 的生成速率表示 α-KGDH 活性。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏。

测定操作：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2、样本测定

(1）在试剂五中加入 18mL 试剂四充分溶解，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min；现配现用；

(2）在试剂六中加入 1mL 蒸馏水，充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

(3）在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本、10μL 试剂六和 180μL 试剂五，混匀，立即记录340nm 处 20s 时的吸光值 A1 和 2min20s 后的吸光值 A2 ，计算 ΔA=A2-A1。

注 意：

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。