α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)测定试剂盒/分光光度法/48样

α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)测定试剂盒/分光光度法/48样

测定意义：

α-KGDH（EC 1.2.4.2）广泛存在于动物、植物微生物和培养细胞的线粒体中，是三羧酸循环调控关键酶之一，催化 α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰辅酶 A。

测定原理：

α-KGDH 催化 α-酮戊二酸、NAD+ 和辅酶 A 生成琥珀酰辅酶 A 、 二氧化碳和 NADH ，NADH 在 340 nm有特征吸收峰，以 NADH 的生成速率表示 α-KGDH 活性。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

测定操作：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm 处，蒸馏水调零。

2、工作液于37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）孵育 5min。

3、在 1mL 石英比色皿中依次加入 40μL 试剂十、60μL 样本和 1.1mL 工作液，混匀，立即记录 340nm 处 20s的吸光值 A1 和 2min20s 时的吸光值 A2 ，计算 ΔA=A2-A1。

注 意：

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。