耳念珠菌染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 耳念珠菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Candida auris Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR3216 |
产品用途
科研用途，适用于耳念珠菌（Candida auris）的定性及定量检测，检测下限为1.0 ng/μL。
技术原理
基于荧光定量PCR技术，通过特异性引物和荧光染料对靶标DNA进行扩增与实时检测，结合标准曲线实现定量分析。
试剂盒组成
预混反应液：含Taq DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺缓冲液及荧光染料。
阳性对照：无传染性DNA片段（1×10⁸拷贝/μL）。
模板稀释液：用于标准品梯度稀释。
阴性对照：无DNA模板的缓冲液。
实验步骤
标准曲线制备（以10²~10⁷拷贝/μL为例）
标记离心管：编号7至2，分别对应10⁷~10²拷贝/μL梯度。
稀释阳性对照：
7号管：加入45 μL稀释液 + 5 μL阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），震荡混匀，得10⁷拷贝/μL。
依次梯度稀释至2号管（10²拷贝/μL），每步更换枪头。
保存：稀释后标准品置于冰上备用。
PCR反应体系配制
每20 μL反应体系：
预混液10 μL
引物探针混合液2 μL
模板DNA 2 μL
ddH₂O补至20 μL。
上机检测
设置PCR程序：
预变性：95℃ 5分钟
循环阶段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集荧光信号）。
数据分析：根据标准曲线计算样品中耳念珠菌DNA浓度。
注意事项
防污染：操作需在独立洁净区域进行，使用带滤芯枪头。
标准品处理：避免反复冻融，稀释后尽快使用。
适用范围：仅限科研，不可用于临床诊断。
性能参数
灵敏度：检测下限0.1%（混合样品）或1.0 ng/μL（纯DNA）。
线性范围：10²~10⁷拷贝/μL（R²≥0.99）。
特异性：不与常见病原体DNA发生交叉反应。
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