克柔念珠菌染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 克柔念珠菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Candida krusei Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR3654 |
产品概述
本试剂盒采用SYBR Green I染料法荧光定量PCR技术，专用于克柔念珠菌（Candida krusei）的快速、高灵敏检测。适用于临床样本、环境样本或科研中核酸的定性及定量分析，具有全仪器平台兼容性、高特异性和重复性。
检测原理
通过优化设计的克柔念珠菌特异性引物扩增靶标DNA，SYBR Green I染料嵌入双链DNA后释放荧光信号，实时监测扩增曲线，结合标准品实现精确定量。
组分列表
2×荧光PCR预混液：含热启动DNA聚合酶、dNTPs及缓冲体系。
阳性对照：克柔念珠菌特异性DNA片段（10^8拷贝/μL），需按说明书稀释后使用。
阴性对照：无核酸酶水。
模板稀释液：用于标准品梯度制备。
操作步骤
1. 标准品稀释（示例：6个10倍梯度）
标记离心管：编号7至2，分别加入45 μL模板稀释液。
梯度稀释：
7号管：加入5 μL阳性对照（10^8拷贝/μL），震荡混匀，得到10^7拷贝/μL标准品。
依次转移5 μL至下一管，最终获得10^2-10^7拷贝/μL系列浓度。
保存：稀释后标准品需置于冰上备用，避免反复冻融。
2. PCR反应体系配制
推荐体系（20 μL）：
2×预混液：10 μL
引物混合液：2 μL
模板DNA：2 μL
无核酸酶水：补至20 μL。
3. 扩增程序
预变性：95℃ 5分钟；
循环阶段（40次）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；
熔解曲线分析：60℃至95℃，每0.5℃递增。
性能参数
灵敏度：可检测低至10拷贝/μL的靶标DNA。
特异性：不与近平滑念珠菌、白色念珠菌等常见病原体交叉反应。
线性范围：10^2-10^7拷贝/μL（R²≥0.99）。
注意事项
操作需在独立洁净区域进行，避免气溶胶污染。
阳性对照为非活体DNA片段，无需生物安全防护。
熔解曲线需呈现单一峰形，否则提示非特异性扩增。
储存与有效期
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
有效期：12个月。
应用范围
适用于科研、临床诊断及环境监测，不可用于治疗决策。
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