产品概述
本试剂盒专用于念珠状链杆菌（Streptobacillus moniliformis）的染料法荧光定量PCR检测，具备高灵敏度和特异性，适用于定性及定量分析。定量检测线性范围覆盖至少5个数量级，可满足临床、科研及环境样本的检测需求。
产品名称 | 念珠状链杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Streptobacillus moniliformis Dye-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR3355 |
包装规格及成分
规格：50次/盒（20μL反应体系）
核心组分：
2×荧光定量PCR预混液（含SYBR Green染料、dNTPs、Mg²⁺及稳定剂）
引物混合液（特异性靶向念珠状链杆菌保守序列）
阳性对照（1×10⁸拷贝/μL DNA片段，非活体样本，避免生物污染风险）
阴性对照（无核酸酶水）
10×ROX参比染料（适配部分机型，需根据仪器要求选择添加）
实验流程
1. 样本制备与DNA提取
样本数量：若检测N个样本，需额外设置2个对照（N+2），包括：
阳性对照（PC）：使用试剂盒提供的阳性对照DNA（10μL，1×10⁶拷贝/μL）稀释至与样本相同体积。
阴性对照（NC）：以无核酸酶水替代样本。
DNA提取：兼容市售细菌DNA提取试剂盒，建议按所选试剂盒说明书操作。
2. 标准曲线制备（定量检测适用）
稀释步骤：
标记离心管（7至2号），依次加入45μL模板稀释液。
梯度稀释阳性对照（从1×10⁸拷贝/μL开始，10倍递减至1×10²拷贝/μL），每步需更换枪头并充分混匀。
注意事项：稀释需在独立区域进行，避免交叉污染。
3. PCR扩增程序
反应体系：20μL（含2μL模板DNA）
推荐循环参数：
预变性：95℃ 5分钟
扩增：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（40循环，采集荧光信号）
熔解曲线分析：60℃→95℃（0.5℃/秒）
4. 结果分析
定性检测：熔解曲线单峰且Ct值≤35判为阳性。
定量检测：根据标准曲线计算拷贝数。
质控要求：
阴性对照无扩增（Ct值≥40或无信号）。
阳性对照Ct值在预期范围内。
注意事项
污染控制：实验分区操作（样本制备、PCR配制、扩增区），使用带滤芯枪头。
电泳验证：若需确认扩增产物，建议使用1.5%-2.0%琼脂糖凝胶，预期条带约200bp。
无效实验判定：若阴性对照出现扩增，表明污染，需终止实验并排查原因。
储存与稳定性
保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（有效期12个月）。
运输：干冰或冰袋低温运输。
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关键字： 念珠状链杆菌;染料法;PCR试剂盒;