大鼠细胞色素P4502E1(CYP2E1)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心ELISA检测原理，特异性识别大鼠CYP2E1蛋白。酶标板包被纯化的CYP2E1捕获抗体，待测样本中的CYP2E1抗原可与固相抗体高效特异性结合，洗板后加入酶标记检测抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经显色、终止反应后，吸光度值随样本CYP2E1含量升高而增大，通过标准曲线计算可精准定量大鼠CYP2E1的浓度。
基本参数‌：

产品名称：大鼠细胞色素P4502E1(CYP2E1)ELISA试剂盒

英文名称：CYP2E1 ELISA Kit
货号：Y-E1128

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测浓度≤0.2ng/mL

检测范围：0.5ng/mL - 25ng/mL

反应时间：全程120分钟，孵育60分钟，显色40分钟

保存条件：2-8℃密封保存，标准品-20℃低温冻存，避免反复冻融

有效期：未开封10个月，分装标准品可保存3个月

特异性：专一靶向大鼠CYP2E1亚型，与其他CYP450亚型无交叉反应

重复性：板内CV≤4%，板间CV≤6%

注意事项：酒精诱导样本需做好分组对照；样本需低温制备，防止酶蛋白失活。
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

试剂盒组分室温平衡 23min，稀释 CYP2E1 标准品构建浓度梯度，待测样本稀释后加样，空白孔加稀释液，每孔 46μL。

每孔加入酶标记液 54μL，封板避光，37℃孵育 67min。

洗板 5 次，每次浸泡 32s，甩干微孔内液体。

加入显色混合液 100μL，室温避光显色 17min。

加入终止液 50μL 终止显色。

450nm 酶标仪读取 OD 数值。

根据标准曲线计算 CYP2E1 样本浓度，校正稀释系数。
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