海藻糖含量试剂盒说明书
微量法 100管/96样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
海藻糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。由于海藻糖具有独特的不同于其他碳水化合物的生物学特性，能在干旱、高温、脱水、冷冻、高渗透压及毒性物质等恶劣环境下保护生物体细胞蛋白质、脂肪、糖类、核酸等组分不受损害。
测定原理：
蒽酮比色法。具有灵敏度高﹑简便快捷﹑适用于微量样品的测定等优点。
组成：
产品名称 | GMS015-100T/96S | Storage |
提取液：液体 | 100ml | 4℃ |
试剂一：粉剂 | 1瓶 | 4℃ |
说明书 | 一份 |
自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板﹑研钵、浓硫酸（不允许快递）和蒸馏水。
海藻糖提取：
1、细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3S，间隔10S，重复30次），室温静置45min，振荡3~5次，冷却后，8000g，25℃离心10min，取上清。
2、组织的处理：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），冰浴匀浆，室温静置45min，振荡3~5次，冷却后，8000g，25℃离心10min，取上清。
3、血清（浆）的处理：按照血清（浆）体积（ml）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议取0.1ml血清（浆）加入1ml提取液），冰浴匀浆，室温静置45min，振荡3~5次，冷却后，8000g，25℃离心10min，取上清。
测定步骤：
分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至620nm，蒸馏水调零。
调节水浴锅至95度。
3、工作液的配制：临用前在试剂一中加入3.75ml蒸馏水后，缓慢加入21.25ml浓硫酸，不断搅拌，充分溶解，待用；用不完的试剂4℃保存一周；
4、样本测定：取60μl样本和240μl工作液至EP管中，95度水浴10 min（盖紧，防止水分散失），自然冷却至室温，取200uL至微量石英比色皿或96孔板中，在620 nm 波长下记录测定吸光度值A。
注意：由于工作液具有强腐蚀性，请谨慎操作。
若吸光值大于1，请将样本用提取液稀释后再测定，计算公式中乘以相应的稀释倍数。
海藻糖含量计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归方程为y = 8.8976x+0.0729；x为标准品浓度（mg/ml），y为吸光值。
2、按样本鲜重计算：
海藻糖含量(mg/g 鲜重)= [V1×(A -0.0729)÷8.8976]÷(W×V1÷V2)=0.112×(A -0.0729) ÷W。
3、按样本蛋白浓度计算：
海藻糖含量(mg/mg prot)= [V1×(A -0.0729) ÷8.8976]÷(V1×Cpr)=0.112×(A -0.0729) ÷Cpr。
4、按细菌或细胞密度计算：
海藻糖含量(μg/104 cell)=[1000×V1×(A -0.0729) ÷8.8976]÷(500×V1÷V2)=0.224×(A -0.0729)
5、血清（浆）海藻糖含量计算
海藻糖含量（mg/ml）＝[V1×(A -0.0729）÷8.8976 )÷(V3×V1÷V2)=1.12×(A -0.0729)
1000：1mg/ml=1000µg/ml；V1：加入反应体系中样本体积，60μl=0.06ml；V2：加入提取液总体积1ml；；V3：加入血清（浆体积），0.1ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样品质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
b.用96孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归方程为y = 4.4488x+0.0729；x为标准品浓度（mg/ml），y为吸光值。
2、按样本鲜重计算：
海藻糖含量(mg/g 鲜重)=[ V1×(A -0.0729)÷4.4488]÷(W×V1÷V2)=0.224×(A -0.0729) ÷W。
3、按样本蛋白浓度计算：
海藻糖含量(mg/mg prot)= [V1×(A -0.0729)÷4.4488]÷(V1×Cpr)=0.224×(A -0.0729) ÷Cpr。
4、按细菌或细胞密度计算：
海藻糖含量(μg/104cell)=[1000×V1×(A-0.0729)÷4.4488]÷(500×V1÷V2)=0.448×(A -0.0729)
5、血清（浆）海藻糖含量计算
海藻糖含量(mg/ml)=[V1×(A -0.0729）÷4.4488 )÷(V3×V1÷V2)=2.24×(A -0.0729)
1000：1mg/ml=1000µg/ml；V1：加入反应体系中样本体积，60μl=0.06ml；V2：加入提取液总体积1ml；；V3：加入血清（浆体积），0.1ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
注意：最低检测限为10μg/g鲜重或0.1μg/ mg prot
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