HiFi One-Step RT-PCR Mix(电泳)

基本信息‌

‌英文名称‌：HiFi One-Step RT-PCR Mix (for Electrophoresis)
作用机制：将逆转录酶、高保真DNA聚合酶、dNTP、缓冲液等成分预混，可在同一反应管内完成RNA逆转录和cDNA扩增两步反应，高保真聚合酶能有效降低扩增过程中的错配率，产物可直接用于电泳检测。 

适用样本：总RNA、mRNA样本，适用于基因表达分析、病原体检测等需要一步法RT-PCR的实验，产物用于琼脂糖凝胶电泳检测。
产品概述
专为反转录PCR（RT-PCR）电泳检测设计的预混体系，整合了高性能反转录酶、DNA聚合酶、dNTP、反应缓冲液等关键组分，实现RNA反转录与DNA扩增的一步化操作，大幅简化实验流程，减少人为操作误差。该产品具备高保真特性，能有效保证扩增产物的准确性，尤其适用于对扩增片段精度要求较高的电泳检测场景，可广泛应用于基因表达分析、分子克隆等分子生物学研究。
产品特点
一步化操作：整合了高性能反转录酶、DNA聚合酶、dNTP、反应缓冲液等关键组分，实现RNA反转录与DNA扩增的一步化操作

高保真特性：能有效保证扩增产物的准确性，尤其适用于对扩增片段精度要求较高的电泳检测场景

减少误差：大幅简化实验流程，减少人为操作误差

广泛应用：可广泛应用于基因表达分析、分子克隆等分子生物学研究
实验前准备

试剂与耗材检查：确认PCR预混液、上下游引物、模板DNA、无酶水等试剂在有效期内，外观无浑浊、沉淀；PCR管、枪头需为无酶无菌规格。

仪器预热：提前10-15分钟启动PCR仪，设置好反应程序，确保仪器达到预设温度。

环境准备：在超净工作台内操作，佩戴无粉手套，避免交叉污染；操作前用75%酒精擦拭台面和移液器。

反应体系配制

冰上操作：将所有试剂放置于冰盒内，避免酶失活。

体系配比（以25μL体系为例）：

PCR预混液（含Taq酶、dNTP、Buffer）：12.5μL

上游引物（10μM）：1μL

下游引物（10μM）：1μL

模板DNA：1-5μL（根据模板浓度调整）

无酶水：补足至25μL

轻柔混匀：用移液器轻轻吹吸混合液3-5次，避免产生气泡；若有气泡可短暂离心去除。

分装体系：将配制好的反应液分装至PCR管中，每管25μL，盖紧管盖。

PCR仪上机反应

程序设置：根据引物Tm值和实验需求设置三步法或两步法程序：

预变性：95℃，3-5分钟

循环阶段：95℃变性30秒，55-65℃退火30秒，72℃延伸（根据片段长度调整，1kb约1分钟），循环25-35次

终延伸：72℃，5-10分钟

保温：4℃。

上机运行：将PCR管放入PCR仪样品槽，确保管盖紧密贴合；启动程序，等待反应完成。

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注意事项

无菌操作：所有试剂和耗材需高压灭菌或无菌处理，避免外源DNA污染

温度控制：酶、dNTP等试剂需-20℃储存，避免反复冻融

体系优化：根据引物Tm值、模板类型调整Mg²+浓度和退火温度

对照设置：每次实验需设置阴性对照（无模板）和阳性对照（已知阳性模板）