基本信息
产品名称 | Tli (exo-) DNA Polymerase(5U/ul) | 货号 | P-PR1280 |
规格 | 500U | 用途 | 仅供科研 |
英文名称：Tli (exo-) DNA Polymerase (5U/ul)
作用机制：一种缺失3'-5'核酸外切酶活性的嗜热DNA聚合酶，可在高温下催化DNA链的5'到3'方向合成，无法修复错配碱基，热稳定性高，适合用于高温环境下的DNA合成反应。
适用样本：单链或双链DNA模板，适用于高温PCR扩增、DNA标记、缺口平移等实验，尤其适合在较高温度下进行的反应。
产品概述
该酶是从嗜热菌Thermococcus litoralis中克隆表达并经基因工程改造去除3'-5'外切酶活性的DNA聚合酶，酶活为5U/μl。保留了强大的DNA聚合活性和极端热稳定性，能在高温环境下高效催化DNA合成，同时因缺失3'-5'外切酶活性，不会降解DNA片段末端，适合用于DNA测序、引物延伸、突变引入等对DNA末端完整性要求较高的实验，也可用于PCR扩增，尤其适用于需要高保真度以外的其他特定实验场景。
产品特点
耐高温特性：最适反应温度74℃，95℃仍保持稳定活性
链置换活性：可高效置换DNA链，适用于核酸测序和突变检测
无3'-5'外切酶活性：不会降解DNA片段末端，保证产物完整性
引物延伸能力：能有效延伸带有发夹结构或复杂二级结构的引物
操作步骤
.配制反应体系：（以25μl体系为例）
组分 体积
10×反应缓冲液 2.5μl
MgCl₂（25mM） 1.5-2.5μl（根据模板调整）
dNTPs（10mM each） 0.5μl
上游引物（10μM） 1μl
下游引物（10μM） 1μl
模板DNA 1-5μl
3173 DNA Polymerase 0.2-0.5μl
ddH₂O 补至25μl
.PCR扩增：设置循环参数 95℃预变性3min；95℃变性30s，50-65℃退火30s，72℃延伸（1min/kb），25-35个循环；72℃终延伸10min
.产物处理：扩增产物需添加Loading Buffer后进行1%琼脂糖凝胶电泳
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注意事项
试剂预处理：使用前需按照瓶身标签提示，向漂洗液中加入指定体积的无水乙醇
沉淀处理：若裂解液、结合缓冲液出现沉淀，可在37℃水浴中加热溶解，摇匀后再使用
操作环境：实验需在洁净环境中进行，避免样本交叉污染；所有离心步骤均在室温下完成
试剂保存：试剂盒未开封时，可在15~25℃干燥环境下保存12个月；开封后蛋白酶K需置于-20℃保存，避免反复冻融
安全防护：若试剂接触皮肤或黏膜，需立即用大量自来水冲洗
关键字： Tli (exo-) DNA Polym;
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