BM 无缝克隆试剂盒

基本信息‌

‌英文名称‌：BM Seamless Cloning Kit
作用机制：基于同源重组技术，通过重组酶催化载体和插入片段之间的同源序列发生重组，实现无缝克隆，无需限制性内切酶切割，克隆效率高，可同时进行多片段克隆。

适用样本：适用于分子克隆实验，用于构建重组质粒、基因表达载体等，样本为PCR扩增的目标基因片段和线性化的载体。
产品概述
BM无缝克隆试剂盒是一套基于同源重组技术的分子克隆试剂盒，用于快速、高效地构建重组DNA载体。试剂盒通常包含无缝重组酶混合物、反应缓冲液、阳性对照等组分，可识别目的DNA片段与载体末端的短同源序列（一般为15-30个碱基），并通过重组酶催化同源序列之间的重组反应，将目的片段与载体无缝连接，无需进行限制性内切酶酶切与T4 DNA连接酶连接步骤。该试剂盒操作简便，仅需将目的片段、载体与重组酶混合物混合，在单一温度条件下孵育即可完成重组，大幅缩短了克隆周期。其克隆效率高，可用于单片段克隆、多片段同时拼接、基因定点突变等多种分子克隆应用，且无缝连接的重组载体无冗余序列，避免了对目的基因表达的潜在影响。
产品特点
快速克隆体系：无需酶切与连接，37℃孵育30分钟即可完成重组，克隆周期缩短至1天。

高克隆效率：单片段克隆效率≥95%，多片段拼接效率≥80%，阳性克隆率高。

广谱兼容性：适用于所有线性化载体，插入片段长度可达10kb以上，适配大型基因克隆。

操作简便：试剂盒包含全套试剂，仅需混合载体、片段与重组酶即可完成反应，无需复杂操作。
操作步骤

一、样本准备

取1-5mL漱口水样本转移至15mL离心管中，12000rpm离心10分钟，弃上清，收集细胞沉淀。

二、细胞裂解

向离心管中加入200~400μL细胞裂解液，再加入15~20μL蛋白酶K溶液

涡旋震荡10秒充分混匀，将离心管放入75℃恒温震荡器中，900rpm恒温震荡裂解45分钟

裂解完成后短暂离心，将上清液转移至新的离心管中

三、DNA吸附

向裂解上清中加入等体积的结合缓冲液，轻轻颠倒混匀

将混合液全部转移至一次性吸附柱中，12000rpm离心30秒，弃收集管中的废液

向吸附柱中加入500μL漂洗液，12000rpm离心30秒，弃废液；重复此漂洗步骤1次

四、DNA洗脱

将吸附柱放回收集管，12000rpm离心2分钟，彻底去除残留漂洗液

将吸附柱转移至新的1.5mL离心管中，向吸附柱中心加入50~100μL洗脱缓冲液（可预热至65℃提升洗脱效率）

室温静置2分钟，12000rpm离心1分钟，离心管中的液体即为提取完成的基因组DNA

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使用建议

溶解与保存：建议以液体形式保存于-20℃，避免反复冻融。

反应条件：常规反应温度为37℃，灭活需50℃处理5分钟。

推荐用量：根据实验体系优化，通常每50μL反应体系添加0.1-1U。