基本信息
产品名称 | Gibson无缝克隆试剂盒 | 货号 | P-PR1323 |
规格 | 10T、50T | 用途 | 仅供科研 |
英文名称：Gibson Seamless Cloning Kit
作用机制：利用DNA聚合酶、T5核酸外切酶与DNA连接酶，实现多个DNA片段的无缝克隆；T5核酸外切酶切割DNA片段末端，产生单链突出端，DNA片段通过同源序列互补配对，随后DNA聚合酶修复缺口，DNA连接酶连接形成完整的重组DNA分子。
适用样本：多个DNA片段的无缝拼接、载体构建、基因修饰等实验，无需限制性内切酶与连接酶的传统克隆步骤。
产品概述
Gibson无缝克隆试剂盒是基于Gibson Assembly技术的分子克隆试剂盒，由Daniel G. Gibson开发，是实现多片段DNA无缝拼接的高效工具。该试剂盒包含三种关键酶：5'核酸外切酶、DNA聚合酶与DNA连接酶。5'核酸外切酶可消化DNA片段末端的5'单链区域，产生3'突出末端；DNA聚合酶可填充相邻DNA片段末端的缺口；DNA连接酶则催化连接缺口处的磷酸二酯键，最终实现多个DNA片段的无缝拼接。Gibson无缝克隆技术无需限制性内切酶切割与T4 DNA连接酶连接，仅需将带有同源末端（通常为20-40个碱基对）的多个DNA片段与Gibson酶混合物混合，在50℃条件下孵育即可完成重组。该试剂盒可同时拼接2-10个甚至更多的DNA片段，拼接效率高，适用于复杂载体构建、基因组合成、代谢途径工程等多种分子生物学研究场景，为合成生物学与基因工程研究提供了强大的技术支持。
产品特点
多片段同时拼接：一次反应可拼接2-10个DNA片段，实现复杂基因组合成与载体构建。
无缝连接技术：通过5'核酸外切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶协同作用，实现片段间无缝拼接，无冗余序列。
高效重组效率：多片段拼接效率≥80%，比传统酶切连接方法效率高10-20倍。
广泛应用场景：适用于代谢途径工程、合成生物学、基因敲除载体构建等复杂分子克隆操作。
实验前准备
试剂与耗材检查：确认PCR预混液、上下游引物、模板DNA、无酶水等试剂在有效期内，外观无浑浊、沉淀；PCR管、枪头需为无酶无菌规格。
仪器预热：提前10-15分钟启动PCR仪，设置好反应程序，确保仪器达到预设温度。
环境准备：在超净工作台内操作，佩戴无粉手套，避免交叉污染；操作前用75%酒精擦拭台面和移液器。
反应体系配制
冰上操作：将所有试剂放置于冰盒内，避免酶失活。
体系配比（以25μL体系为例）：
PCR预混液（含Taq酶、dNTP、Buffer）：12.5μL
上游引物（10μM）：1μL
下游引物（10μM）：1μL
模板DNA：1-5μL（根据模板浓度调整）
无酶水：补足至25μL
轻柔混匀：用移液器轻轻吹吸混合液3-5次，避免产生气泡；若有气泡可短暂离心去除。
分装体系：将配制好的反应液分装至PCR管中，每管25μL，盖紧管盖。
PCR仪上机反应
程序设置：根据引物Tm值和实验需求设置三步法或两步法程序：
预变性：95℃，3-5分钟
循环阶段：95℃变性30秒，55-65℃退火30秒，72℃延伸（根据片段长度调整，1kb约1分钟），循环25-35次
终延伸：72℃，5-10分钟
保温：4℃。
上机运行：将PCR管放入PCR仪样品槽，确保管盖紧密贴合；启动程序，等待反应完成。
公司正在出售的产品
麦芽香肉杆菌PCR试剂盒 | 爱德华氏菌通用PCR检测试剂盒 |
鸡痘病毒PCR检测试剂盒 | 小而密低密度脂蛋白ELISA试剂盒 |
山楂染料法PCR鉴定试剂盒 | CD24分子ELISA试剂盒 |
志贺氏菌属通用PCR检测试剂盒 | 串珠镰刀菌PCR试剂盒 |
金黄地鼠白血病病毒RT-PCR试剂盒 | 鹌鹑奇异线虫PCR检测试剂盒 |
人腺病毒B79型PCR试剂盒 | 唇饰带线虫PCR检测试剂盒 |
乳房链球菌PCR试剂盒 | 草鱼呼肠孤病毒毒通用RT-PCR试剂盒 |
巨细胞病毒PCR试剂盒 | 荧光sumeiPCR试剂盒 |
狷羚疱疹病毒1型PCR检测试剂盒直销 | 植物内源基因tRNA-Leu核suan检测试剂盒 |
肉毒杆菌E型（CB-E）核suan检测试剂盒 | 布氏罗得西亚锥虫PCR检测试剂盒 |
芥末PCR检测试剂盒 | 布氏锥尾线虫PCR试剂盒 |
甲基化CpG结合蛋白2ELISA试剂盒 | 支气管败血波氏杆菌PCR检测试剂盒说明书 |
八聚体转录因子ELISA试剂盒 | Gibson无缝克隆试剂盒淀粉样蛋白β前体样蛋白2ELISA试剂盒 |
嵌合蛋白2ELISA试剂盒 | Citron蛋白ELISA试剂盒 |
白介su1ζELISA试剂盒 | Dermokine蛋白ELISA试剂盒 |
注意事项
无菌操作：所有试剂和耗材需高压灭菌或无菌处理，避免外源DNA污染
温度控制：酶、dNTP等试剂需-20℃储存，避免反复冻融
体系优化：根据引物Tm值、模板类型调整Mg²+浓度和退火温度
对照设置：每次实验需设置阴性对照（无模板）和阳性对照（已知阳性模板）
关键字： Gibson无缝克隆试剂盒;Gibson Seamless Clon;
派瑞曼pyram?是上海博湖生物科技有限公司（Shanghai Bohu Biological Technology Co., Ltd.，China）的产品品牌。
派瑞曼pyram?是一家化学、生化和材料科学等领域的科研用研发产品的制造商和供应商,我们的产品在相当宽的基础科学领域得到广泛的应用。 客户包括学术界、工业界和政府的研究和开发实验室以及制药、生物技术、化工/石化行业等具商业规模的企业。
派瑞曼pyram?除包括化学、分析化学、生命科学、材料科学和病理科学产品。质量是所有产品和服务最关键的组成部分,我们通过质量和实力赢得客户的信赖。产品的质量是企业的生命。
公司秉承"专注品质、诚信为本、服务至上、合作共赢"的企业文化积极参与生物领域的技术创新和技术服务,力求为我国科研事业更好的,更专业的服务！