pBM21快速克隆试剂盒（克隆载体 含自杀基因）

基本信息‌

‌英文名称‌：pBM21 Rapid Cloning Kit (Cloning Vector with Suicide Gene)
作用机制：载体上含有自杀基因，在未发生重组的情况下，自杀基因表达导致宿主细胞死亡；当目标片段插入到载体中，自杀基因被破坏，重组质粒可在宿主细胞中存活和复制，从而实现快速克隆，筛选得到重组子。

适用样本：适用于分子克隆实验，用于快速构建重组质粒，样本为PCR扩增的目标基因片段。
产品概述
pBM21快速克隆试剂盒是一款以pBM21为克隆载体的快速分子克隆试剂盒，载体中整合有自杀基因。该试剂盒基于特定的克隆原理（如同源重组或TOPO克隆等），可快速将目的DNA片段插入到pBM21载体中。载体中的自杀基因在特定条件下可发挥作用，用于筛选正确的重组克隆：当未发生重组的载体（含自杀基因）进入宿主细胞后，自杀基因表达可导致宿主细胞死亡，而重组后的载体因自杀基因被破坏（或失活），可使宿主细胞存活，从而高效筛选出阳性克隆。该试剂盒克隆效率高、操作简便，无需复杂的酶切与连接步骤，可在短时间内完成载体构建，适用于基因克隆、蛋白表达载体构建、基因功能研究等实验场景。
产品特点
自杀基因筛选：载体含自杀基因，未重组的载体进入宿主细胞后导致细胞死亡，阳性克隆率高达99%以上。

快速克隆流程：无需酶切与连接，15分钟完成重组，转化后直接筛选阳性克隆，实验周期仅需1天。

高拷贝载体：载体为高拷贝质粒，重组后质粒提取产量高，满足后续实验需求。

多功能元件：包含多克隆位点、T7启动子、抗性筛选标记等元件，适配蛋白表达与载体改造。
操作步骤

一、实验前准备

向漂洗液1中加入60mL无水乙醇，向漂洗液2中加入45mL无水乙醇，充分混匀后标记

载体RNA溶液配制：向300μg载体RNA冻干粉中加入300μL无酶水，充分溶解后得到1μg/μL的工作液，分装后-20℃保存

将冷冻样本置于室温解冻，轻轻颠倒混匀后备用

二、手工提取流程

样本裂解：取200μL血液样本至1.5mL离心管中，加入20μL蛋白裂解酶、300μL裂解缓冲液，振荡混匀10秒，室温孵育10分钟（每3分钟颠倒混匀1次）

磁珠结合：加入15μL磁珠悬浮液（使用前充分振荡混匀），振荡混匀10秒，室温孵育10分钟（每3分钟颠倒混匀1次）

磁珠分离：将离心管置于磁力架上，静置1-2分钟至磁珠完全吸附，小心吸弃上清液（避免触碰磁珠）

洗涤纯化：

取下离心管，加入500μL漂洗液1，振荡混匀1分钟，再次置于磁力架上分离磁珠，吸弃上清

重复上述操作1次

加入500μL漂洗液2，振荡混匀1分钟，置于磁力架上分离磁珠，吸弃上清

重复上述操作1次

干燥磁珠：保持离心管在磁力架上，室温晾干5-10分钟（确保乙醇完全挥发，避免过度干燥）

核酸洗脱：加入100-200μL洗脱缓冲液，振荡混匀后56℃孵育5分钟，置于磁力架上分离磁珠，上清液即为提取的核酸

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注意事项

实验操作需在洁净环境中进行，佩戴手套、口罩，避免样本交叉污染

蛋白酶K需-20℃保存，使用时避免反复冻融，可分装后使用

还原剂需现用现加，避免长时间暴露于空气中失效

若毛囊样本角质化严重，可适当延长孵育时间或增加还原剂用量

提取的DNA可置于-20℃长期保存，短期可在4℃储存

若需提高DNA产量，可将洗脱液重复洗脱一次吸附柱