Equi-phi29 DNA Polymerase

基本信息‌

‌英文名称‌：Equi-phi29 DNA Polymerase
作用机制：一种来自嗜热菌的DNA聚合酶，具有5'→3' DNA聚合酶活性、3'→5'外切酶活性与链置换活性；可用于等温扩增（如MDA）、DNA测序、基因分型等实验；具有高效的DNA扩增能力与保真性。 

适用样本：DNA片段的等温扩增、全基因组扩增（MDA）、基因分型、测序等实验，尤其适用于低浓度DNA样本的扩增。
产品概述
Equi-phi29 DNA聚合酶是从嗜热噬菌体Equi-phi29中分离得到的一种DNA聚合酶，具有超强的链置换活性与高保真性。它能够以单链或双链DNA为模板，催化DNA的合成，在合成过程中可置换下游的DNA链，而无需解旋酶的辅助。Equi-phi29 DNA聚合酶还具有3'→5'核酸外切酶校对活性，可有效减少DNA合成过程中的碱基错配，保证DNA合成的高保真性。该酶在分子生物学研究中有多种重要应用，如滚环扩增（RCA）、全基因组扩增（WGA）、DNA测序、DNA文库构建、单分子DNA分析等。在滚环扩增中，Equi-phi29 DNA聚合酶可高效扩增环状DNA模板，产生大量的串联重复DNA产物；在全基因组扩增中，它可从微量样本中扩增出完整的基因组DNA，为微量样本的基因组研究提供了可能。Equi-phi29 DNA聚合酶的链置换活性与高保真性使其成为分子生物学领域中一种极具价值的工具酶。
产品特点
超强链置换活性：无需解旋酶辅助即可置换下游DNA链，是滚环扩增（RCA）的首选酶。

超高保真性：3'→5'核酸外切酶校对活性，错配率比Taq酶低100倍以上。

持续合成能力强：单个酶分子可连续合成长达100kb的DNA链，合成效率高。

模板兼容性广：可使用单链DNA、双链DNA、环状DNA等多种模板类型。

应用独特：广泛应用于全基因组扩增（WGA）、DNA测序、单分子DNA分析等前沿领域。
核心PCR试剂及使用方法

1. Taq DNA聚合酶

作用：催化DNA链的延伸，是PCR反应的核心酶

使用方法：

通常按0.5-2U/25μL体系添加，具体用量参照试剂说明书

酶对温度敏感，需在冰上操作，避免反复冻融

最后加入酶液，防止提前激活导致非特异性扩增

2. dNTP混合液

作用：提供DNA合成的原料（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）

使用方法：

终浓度一般为200μmol/L每种dNTP，总浓度800μmol/L

避免反复冻融，可分装成小体积储存

注意pH值，过酸或过碱会抑制聚合酶活性

3. PCR缓冲液

作用：提供酶促反应的适宜环境（pH、离子浓度）

使用方法：

通常为10×浓度，使用时稀释至1×终浓度

含Mg²+的缓冲液需注意Mg²+浓度，一般1.5-2.5mmol/L为最优范围

部分缓冲液含KCl、Tris-HCl等成分，无需额外添加

4. 引物（上游/下游）

作用：定位扩增区域，引导DNA合成起始

使用方法：

终浓度一般为0.1-1μmol/L，根据引物Tm值调整

引物需用TE缓冲液或无菌水溶解，浓度计算准确

避免引物降解，-20℃分装储存，避免反复冻融

5. 模板DNA

作用：提供扩增的原始DNA模板

使用方法：

模板浓度一般为1ng-1μg/25μL体系，根据模板类型调整

基因组DNA需充分纯化，避免蛋白、RNA等杂质污染

质粒DNA可适当减少用量，一般10-100ng即可

公司正在出售的产品

实验流程

反应体系配制：按1×工作浓度混合预混液、模板（10-100 ng）、引物（0.2-0.5 μM）及无核酸酶水。

PCR程序：

预变性：95℃ 30 sec

扩增循环（40×）：95℃ 5 sec → 60℃ 30 sec（荧光采集）

熔解曲线分析：60-95℃梯度升温。

注意事项

避免反复冻融，推荐分装保存。

熔解曲线需呈现单一峰以确保扩增特异性。

若需绝对定量，建议配套标准品使用。