竞争型酶联免疫吸附原理,微孔板预包被 SP 重组抗原,样本内源性 SP 与固相抗原竞争结合酶标抗 SP 抗体,孵育洗涤后底物显色,SP 含量与显色吸光度呈负相关,结合梯度标准品绘制标准曲线,定量检测血清、组织上清等样本中大鼠 P 物质含量。
产品参数:
产品名称 | 大鼠P物质(SP)ELISA试剂盒 | 货号 | Y-E1332 |
英文名称 | SP ELISA Kit | 规格 | 48T/96T |
灵敏度:最低检测灵敏度≤1.0pg/mL
检测范围:2pg/mL - 800pg/mL
反应时间:总反应时长120分钟(样本温育60分钟+洗板+显色30分钟+终止读数)
保存条件:2-8℃避光冷藏保存,洗涤液、终止液可常温避光存放,开封试剂7日内用完
有效期:原装未开封12个月
显色系统:HRP标记二抗介导TMB显色体系
检测波长:450nm
标准曲线绘制:以标准品梯度浓度为横轴,OD检测值为纵轴,四参数拟合标准曲线,计算样本浓度
特异性:特异性结合大鼠P物质,与神经肽A、神经肽B等同类神经肽无明显交叉反应
重复性:板内CV≤7%,板间CV≤9%
注意事项:血清、血浆样本需无溶血、无浑浊,反复冻融样本会导致SP降解,影响检测结果;温育需恒温37℃,温度波动会导致实验误差。
关键注意事项:
实验前需仔细阅读对应试剂盒的说明书,不同试剂盒的孵育时间、加样量可能存在差异
所有试剂需按要求储存,未用完的试剂需密封后放回规定温度(通常2-8℃或-20℃)
避免试剂污染,不同组分的移液器枪头需分开使用
洗板时需确保每孔都被洗涤液覆盖,防止出现假阳性结果
显色过程需避光,避免阳光直射影响结果
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实验操作流程:
试剂平衡:全部试剂室温放置 30min,浓缩洗涤液按 1:20 稀释混匀备用,底物液全程避光存放。
标准品梯度配制:SP 冻干标准品溶解后连续稀释 7 个梯度,设置空白对照孔,所有梯度做双复孔。
加样操作:标准孔 50μL 标准液,血清 / 脑脊液样本孔加 50μL 待测样本,空白孔加入稀释液 50μL。
酶标抗体孵育:每孔添加 50μL HRP 标记 SP 检测抗体,密封酶标板,37℃避光孵育 70min。
洗板流程:弃液加满洗涤液浸泡 40s,吸水纸拍干,重复洗板 6 次,降低非特异性结合背景。
显色反应:各孔添加底物 A、B 各 50μL,避光 37℃显色 15min,观察蓝色梯度分层。
终止读数:终止液 50μL 混匀,10min 内 450nm 读取吸光值,标准曲线计算样本 SP 含量。
关键字: 大鼠P物质;SP;ELISA试剂盒;
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