蔗糖磷酸化酶(SP)测定试剂盒/分光光度法/48样
测定意义:
SP(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中,裂解葡萄糖苷键,催化葡萄糖基转移到果糖、木糖、半乳糖和鼠李糖等,合成相应的葡萄糖基低聚糖。此外,SP 还能催化氢醌合成熊果苷,具有极强的美白效果,在化妆品工业中具有重要应用。
测定原理:
SP 能够以磷酸为受体,催化蔗糖产生 1-磷酸葡萄糖,在葡萄糖磷酸变位酶催化下变位为 6-磷酸葡萄糖,在 6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下还原 NADP+生成 NADPH ,导致 340nm 光吸收值增加。测定 340nm 吸光度增加速率,即可计算 SP 活性。
自备实验用品及仪器:
天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计、1 mL 石英比色皿和蒸馏水。测定步骤和加样表:操作表
试剂名称
对照管
测定管
试剂一 (μL)
600
试剂二(μL)
100
试剂三(μL)
200
样本(μL)
蒸馏水(μL)
迅速混匀,于 1mL 石英比色皿,37℃下测定 340nm 的初始吸光值与反应 2min 后的吸光值,测定管记作 A1与 A2 ,对照管记作 A3 与 A4 ,△A=(A2- A1 )-(A4- A3)。
1. 可选用 BCA 法测定蛋白含量试剂盒测定蛋白含量。
2. 样本较多时,可以按照每个样本试剂一:试剂二:试剂三=600:100 :200 (μL)的比例配制工作液,用多少配多少,临用前立刻配制,10 分钟内使用。
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