大鼠儿茶酚胺(CA)ELISA试剂盒

本试剂盒采用竞争性ELISA检测原理，将CA抗原包被于酶标板微孔，封闭后加入标准品、待测大鼠体液样本和CA特异性免疫抗体，样本中的CA与固相包被CA竞争结合有限抗体，样本CA含量越高，结合在酶标板上的抗体越少，洗板去除未结合反应物后，加入酶标记二抗和显色底物进行显色，终止后测定吸光度，通过标准曲线的负相关关系计算样本中CA的含量。
基本参数‌：

产品名称：大鼠儿茶酚胺(CA)ELISA试剂盒

英文名称：CA ELISA Kit
货号：Y-E1299

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测限0.05nmol/L，可检测大鼠血浆、尿液中极低浓度儿茶酚胺

检测范围：0.1nmol/L～20nmol/L，适配大鼠生理、病理状态下CA浓度检测需求

反应时间：总反应时长120分钟，抗体温育90分钟，显色反应30分钟，无需提前孵育

保存条件：全套试剂2～8℃避光冷藏，显色液、终止液需单独避光存放，禁止高温暴晒

有效期：原装未拆封有效期6个月，开盖后试剂密封冷藏，20天内使用完毕

显色系统：高纯度TMB显色体系，显色均匀，灵敏度高，终止后颜色稳定不褪色

检测波长：主检测波长450nm，辅助校正波长570nm，降低杂光干扰

标准曲线绘制：设置7个梯度标准浓度，采用四参数拟合曲线，线性相关系数R²≥0.993，拟合度优异

特异性：特异性识别大鼠去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺等儿茶酚胺类物质，与其他胺类物质无交叉反应

重复性：板内CV≤5%，板间CV≤7%，高低浓度样本重复性均达标

注意事项：CA样本极易氧化，采集后需立即低温离心、避光保存；实验全程避免手部、器具污染试剂；显色时间需严格把控，超时会导致数值偏差；废弃试剂按生化废液规范处理。
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

试剂盒室温回温 23min，洗涤缓冲液 1:19 稀释，大鼠肾上腺匀浆避光冰浴，防止儿茶酚胺氧化。

微孔板分孔添加 100μL CA 梯度标准品、肾上腺上清、空白缓冲液。

酶标记抗原工作液 100μL 每孔，覆膜 37℃孵育 54min。

洗涤浸泡 26s，洗涤 3 次，吸干微孔残留液体。

避光 TMB 显色液 100μL，37℃孵育 12min。

终止液混匀微孔，终止显色。

450nm 测 OD，计算大鼠总儿茶酚胺 CA 浓度。
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