大鼠氢化可的松(HYD)ELISA试剂盒

本试剂盒基于竞争法酶联免疫吸附试验原理，适配大鼠氢化可的松（HYD）的微量定量检测。微孔板预包被HYD特异性抗原，检测时样本中的内源性氢化可的松与固相抗原竞争结合酶标特异性抗体，恒温孵育后洗板去除所有未特异性结合的组分。后续底物经酶催化产生显色信号，显色深浅与样本中HYD浓度呈负相关，反应终止后读取吸光度值，结合标准曲线即可准确计算大鼠样本中氢化可的松的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测灵敏度0.09ng/mL，可检出大鼠体内微量氢化可的松基础及应激表达水平。

检测范围：0.25ng/mL - 18ng/mL，覆盖大鼠内分泌调节、应激损伤、免疫异常模型浓度区间。

反应时间：标准反应时长120分钟，恒温分段孵育，结合更充分。

保存条件：2 - 8℃冷藏避光保存，所有试剂禁止冷冻，避免激素抗体失活。

有效期：未拆封试剂盒有效期12个月，稳定性优异。

特异性：特异性结合大鼠氢化可的松，与其他糖皮质激素交叉反应率＜1%。

重复性：板内CV≤4.8%，板间CV≤6.8%，检测精度高、误差小。

注意事项：样本采集后快速分离血清，避免激素降解；孵育温度严格恒定；终止后及时上机读数，避免颜色衰减。
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

1. 试剂室温复温 30min，配制洗涤工作液；大鼠血浆样本低速离心去除脂类漂浮物。

2. 酶标板区分空白、标准、样本孔，标准品孔加梯度 HYD 标准品 50μL，样本孔加待测血浆 50μL。

3. 一步法同步加入酶结合物工作液 100μL，封板封口防止液体蒸发。

4. 37℃避光孵育 60min，全程不移动酶标板。

5. 揭开封板，弃液洗板，每孔浸泡 32s，重复洗板 5 次，拍干微孔。

6. 加入显色 A、B 液各 50μL，轻晃混匀，37℃避光显色 15min。

7. 加入终止液混匀终止反应，450nm 测定 OD 值，换算氢化可的松样本浓度。